[发明专利]一种壁虎抗癌提取物

说明书

技术领域

本发明涉及一种壁虎抗癌提取物。

背景技术

壁虎是我国传统的治疗肿瘤的中药材。大量的临床报道显示，壁虎治疗恶性肿瘤效果显著，干、鲜壁虎、含壁虎的血清、壁虎复方制剂、壁虎蛋白酶水解液等对肿瘤均有较好的疗效。谢爽、王学美等(谢爽，王学美，谢东泽.鲜壁虎提取物抑制C6胶质瘤细胞增值和诱导细胞凋亡的研究.肿瘤防治研究，2003，30：458-461)用不同浓度的鲜壁虎提取液(取活体无蹼壁虎冷冻处死，清水洗净，粉碎匀浆，冻融10次，自然沉淀取上清，低温离心10000r/min，离心20min，取上清)对C6胶质瘤细胞进行研究，结果鲜壁虎提取液在64mg/L、128mg/L、256mg/L浓度时，可以显著抑制C6胶质瘤细胞的生长，且有明显的量-效关系。杨丽华、王学美等(杨丽华，杨金霞，王学美等.壁虎多糖对鼠源肝癌H22体内外作用研究.天津中医药，2008，25：494-496)进行了壁虎多糖对鼠源肝癌H22体内外作用研究，结果发现壁虎多糖在体外作用很强，但对体内移植瘤无作用，因此对壁虎多糖的抗肿瘤作用提出了质疑。李耀辉、耿秀芳等(李耀辉，盛继文，耿秀芳等.无蹼壁虎药用成分抗肿瘤效果.陕西中医，2009，30：899-901)把鲜壁虎置入酒精致死，捣碎匀浆，乙醇溶液浸泡，蒸发除乙醇，再除脂类，得到水提物，最后冷冻干燥，得到干燥物。然后该干燥物以乙醇溶解，经Al₂O₃柱层析，得到15个层析药物样品。经过实验研究发现，这些样品中的第3到第9部分有抑制HepG-2的作用，其余部分作用不明显。而李耀辉等(李耀辉，刘冬梅，盛继文等.无蹼壁虎抗肿瘤成分的提取及其对CT-26小鼠结肠腺癌的抑制作用.第四军医大学学报，2009，30：1103-1106)在无蹼壁虎抗肿瘤成分的提取及其对CT-26小鼠结肠腺癌的研究中，报道有19个层析成分，其中第11到第19个样品无作用，第1到第10样品均有一定的抗肿瘤作用其中第1到第6样品作用最强。康建功、李耀辉等(康建功，张仕状，李耀辉等.鲜无蹼壁虎抗肿瘤活性成分抑制CT-26肿瘤细胞生长实验研究.中国医院药学杂志，2007，27：441-444)还比较了鲜壁虎活性成分及其脂质体对CT-26的作用，发现活性成分脂质体在体内的作用较强。

上述大量的研究结果表明，壁虎提取物具有肯定的抗肿瘤作用，并且在实体瘤治疗方面有良好的应用前景，但目前的壁虎提取物的提取方法较为复杂，而且壁虎提取物对肿瘤的抑瘤效果很难达到氟尿嘧啶和阿霉素的抑瘤水平。

发明内容

本发明的目的是提供一种抑瘤效果好的壁虎抗癌提取物。

为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是：一种壁虎抗癌提取物，其采用如下方法提取而成：

1)将壁虎清洗、晾干，破碎成粉末，置于pH为7.4的三羟甲基氨基甲烷-盐酸的缓冲溶液中，浸泡12小时；

2)浸泡后破碎，离心取上清液加入无水乙醇至乙醇终浓度为55％进行提取，然后离心取上清液即得壁虎醇提液；

3)将壁虎醇提液蒸发浓缩，加入硫酸铵至其浓度为25％，调整pH至7，4℃静置3～4小时，每隔30min搅拌一次，然后离心取上清得上清液；将得到的上清液加入硫酸铵至其浓度为50％，调整PH至4.6，4℃静置3～4小时，每隔30min搅拌一次，然后离心得到沉淀；

4)将沉淀装入截留分子量为3.5KDa透析袋中，将透析袋置于0℃蒸馏水中进行透析，直至透析袋中出现白色絮状物；

5)取出透析袋将白色絮状物进行真空冷冻干燥，得到壁虎抗癌提取物。

步骤2)和步骤3)中所述离心为7000g离心20分钟。

步骤2)所述破碎为超声细胞破碎、胶体磨匀浆。

步骤2)所述加入无水乙醇后，于4℃静置3～4小时，每隔30分钟搅拌一次。

步骤3)所述调整pH采用的是盐酸。

本发明的壁虎抗癌提取物，采用醇提、盐析、透析的方法，从壁虎中提取出具有抗肿瘤作用的多肽分子，使提取物具有很强的抗肿瘤效果，可以作为高效、低毒的抗肿瘤新药物的活性成分。经过试验证明本发明的壁虎抗癌提取物具有很好的抗癌作用，达到了常规抗癌药物氟尿嘧啶和阿霉素的抗癌水平，可以提高机体的免疫力，而且壁虎提取物中含有天然的壁虎多肽，具有毒性低、副作用小的优点。另外本发明的制备方法简单，易于推广应用。

具体实施方式

实施例

1、壁虎晾干与粉碎：把清洗过的干无蹼壁虎1000g晾干后，用粉碎机粉碎为粗粉。