[发明专利]一种转纤维素酶基因重组乳酸杆菌及其制品和应用

权利要求书

1.一种转纤维素酶基因重组乳酸杆菌，其特征在于：它编码的蛋白质具有序列表SEQ ID NO.1所述的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的转纤维素酶基因重组乳酸杆菌，其特征在于：所述的转纤维素酶基因重组乳酸杆菌是将乳酸杆菌的信号肽基因与纤维素酶基因重组到乳酸杆菌的表达载体上，再电转化整合到乳酸杆菌，得到转纤维素酶重组乳酸杆菌。

3.根据权利要求2所述的转纤维素酶基因重组乳酸杆菌，其特征在于：所述的重组乳酸杆菌基因组中整合了带有乳酸杆菌信号肽(signal peptide，sp)的枯草芽孢杆菌的纤维素酶基因(cel)；其中，纤维素酶基因来源于GenBank上的登陆号为AB016164的枯草芽孢杆菌，所扩增的序列是从727-2232bp位碱基；信号肽基因来源于GenBank上的登陆号为Z14250的短小乳酸杆菌L.brevis1.2028，所扩增的序列是260-349位的碱基；将纤维素酶基因和信号肽基因连接后插入到乳酸杆菌表达载体pIlac的多克隆位点，然后再将其整合到干酪乳杆菌L.CECT5276的核糖体结合位点中，从而获得纤维素酶基因重组乳酸杆菌。

4.根据权利要求1所述的转纤维素酶基因重组乳酸杆菌，其特征在于：所述的重组乳酸杆菌在重组表达质粒中，设计并合成的一对特异性引物用于扩增枯草芽孢杆菌的纤维素酶基因，分别为：

上游引物P1：5′-AATCTAGATGTYGAGCCAATATGATGAG-3′(下划线为XbaI酶切位点)；

下游引物P2：5′-TCCCCCGGGACTAATCTGGTACTGATG-3′(下划线为Sma I酶切位点)。

5.根据权利要求1所述的转纤维素酶基因重组乳酸杆菌，其特征在于：所说的纤维素的DNA序列，其包含序列表SEQ ID NO.1的序列或经修饰的序列。

6.根据权利要求1所述的转纤维素酶基因重组乳酸杆菌，其特征在于：所述的重组乳酸杆菌在重组表达质粒中，设计并合成的一对特异性引物用于扩增短小乳杆菌的信号肽基因，其引物分别为：

上游引物P3：5’-AACTGCAGATGCAATCAAGTTTAAAG-3’，PstI位点为CTGCAG；

下游引物P4：5’-CGCTCTAGAGTTAGCTGAAGCAGTCGT-3’，XbaI位点为CTGCAG。.

7.根据权利要求3所述的转纤维素酶基因重组乳酸杆菌，其特征在于：所述的用于扩增短小乳杆菌(Lactobacillus brevis 1.2028)的信号肽基因具有序列表SEQ ID NO.2所述的氨基酸序列。 

8.根据权利要求1所述的转纤维素酶基因重组乳酸杆菌，其特征在于：重组乳酸杆菌含有表达质粒pIlac-sp-cel，重组表达质粒pIlac-cel含有乳酸杆菌复制子ori、核糖体结合位点RBS、操纵子lac、乳酸杆菌信号肽基因sp、纤维素酶基因cel、核糖体结合位点RBS和抗性筛选基因红霉素Ery基因，其表达式为：-ori-RBS-lac-sp-cel-RBS-Ery-。

9.一种该转纤维素酶基因重组乳酸杆菌制备而成的饲料，其特征在于：具体组成为：转纤维素酶基因重组乳酸杆菌占饲料总重的0.1％。

10.一种该转纤维素酶基因重组乳酸杆菌作为添加剂在制备饲料中的应用。