[发明专利]同时检测水产品中醋酸甲羟孕酮和己烯雌酚的方法

权利要求书

1.一种同时检测水产品中醋酸甲羟孕酮和己烯雌酚的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)分别制备醋酸甲羟孕酮和己烯雌酚的人工抗原；

(2)分别制备醋酸甲羟孕酮和己烯雌酚的单克隆抗体并纯化；

(3)利用步骤(1)得到的人工抗原分别偶联液相芯片荧光微球；

(4)利用步骤(2)得到的单克隆抗体进行生物素化；

(5)使用步骤(3)得到的偶联的微球以及步骤(4)得到的生物素化的抗体，通过液相芯片法同时检测水产品中醋酸甲羟孕酮和己烯雌酚残留。

2.根据权利要求1所述的同时检测水产品中醋酸甲羟孕酮和己烯雌酚的方法，其特征在于，所述的步骤(2)中，醋酸甲羟孕酮的单克隆抗体的腹水效价为1∶2.56×10⁶。

3.根据权利要求1所述的同时检测水产品中醋酸甲羟孕酮和己烯雌酚的方法，其特征在于，所述的步骤(2)中，己烯雌酚的单克隆抗体的腹水效价为1∶3.2×10⁶。

4.根据权利要求1所述的同时检测水产品中醋酸甲羟孕酮和己烯雌酚的方法，其特征在于，所述的步骤(2)中，己烯雌酚的杂交瘤细胞腹水效价为1∶1.6×10⁶。

5.根据权利要求1所述的同时检测水产品中醋酸甲羟孕酮和己烯雌酚的方法，其特征在于，步骤(5)中所述的检测水产品中醋酸甲羟孕酮和己烯雌酚残留的步骤依次为：偶联有MPA和DES的微球加入处理好的醋酸甲羟孕酮和己烯雌酚样品溶液，随后加入生物素化的醋酸甲羟孕酮和己烯雌酚的抗体；然后加入稀释好的SA-PE，最后加入终止液，检测荧光强度。

6.根据权利要求5所述的同时检测水产品中醋酸甲羟孕酮和己烯雌酚的方法，其特征在于，包被好的微球一部分加入处理好的醋酸甲羟孕酮和己烯雌酚样品溶液，另一部分加入系列醋酸甲羟孕酮和己烯雌酚标准溶液；标准溶液的浓度包括25ng/mL、12.5ng/mL、6.25ng/mL、3.125ng/mL、1.6ng/mL、0.8ng/mL和0.4ng/mL。

7.根据权利要求5所述的同时检测水产品中醋酸甲羟孕酮和己烯雌酚的方法，其特征在于，所述的检测荧光强度是通过Luminex 200仪器检测荧光强度值，并用Luminex version2.1软件分析数据。

8.根据权利要求5所述的同时检测水产品中醋酸甲羟孕酮和己烯雌酚的方法，其特征在于，检测醋酸甲羟孕酮的抗体稀释度为1∶3000。

9.根据权利要求5所述的同时检测水产品中醋酸甲羟孕酮和己烯雌酚的方法，其特征在于，检测己烯雌酚的抗体稀释度为1∶6400。

10.根据权利要求5所述的同时检测水产品中醋酸甲羟孕酮和己烯雌酚的方法，其特征在于，SA-PE的稀释度为1∶100。