[发明专利]由间接竞争时间分辨荧光免疫分析体系检测烟草中菌核净残留的方法

权利要求书

1.一种由间接竞争时间分辨荧光免疫分析体系检测烟草中菌核净残留的方法，其特征在于：

所述的检测体系中，以菌核净-OVA作为包被抗原，以菌核净多克隆抗体作为识别抗体，以Eu-N1标记的羊抗兔IgG作为二抗，建立与菌核净农药对应的标准抑制曲线，方法是：将菌核净-卵清蛋白OVA连接物作为包被抗原固定于酶标板，再加入梯度稀释的菌核净标准品和菌核净多克隆抗体，让菌核净标准品与包被抗原共同竞争结合抗体，再采用Eu-N1标记的羊抗兔IgG作为二抗，通过时间分辨检测模式读数后，绘制菌核净时间分辨免疫分析的标准抑制曲线，建立线性回归方程，计算抑制中浓度，确定最低检测限和线性检测范围；

所述的检测烟草中菌核净残留是指：对烟草样品前处理后，通过检测体系对其进行检测，判断与样品对应的烟草中菌核净残留量。

2.根据权利要求1所述的由间接竞争时间分辨荧光免疫分析体系检测烟草中菌核净残留的方法，其特征在于：所述的Eu-N1标记的羊抗兔IgG是这样获得的：称取4 mg Eu-N1, 用350 μL蒸馏水溶解，备用；将1 mg亲和纯化后的羊抗兔IgG溶于150 μL蒸馏水，加入pH 9.8的15 μL 0.5 mol/L碳酸盐缓冲液，混合均匀后，将溶解的Eu-N1与羊抗兔IgG混合，4℃静置过夜，次日将过夜的反应物装入截留分子量为8000Da的透析袋中，对超纯水透析3 天，截留物为Eu-N1标记的羊抗兔IgG，于-20℃保存备用。

3.根据权利要求1~2之一所述的由间接竞争时间分辨荧光免疫分析体系检测烟草中菌核净残留的方法，其特征在于：对烟草样品前处理是指：将烟草样品粉碎后，称取1g放入100mL三角瓶中，加20mL丙酮混合均匀， 180rpm振荡提取1小时，抽滤后浓缩近干，再用10ml丙酮复溶残余物并定容，取100μL丙酮复溶物，用检测缓冲液稀释10倍后，直接用于CI-TRFIA检测。