[发明专利]一种白色念珠菌多克隆抗体的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及念珠菌的多克隆抗体制备领域。具体而言，本发明涉及制备针对白色念珠菌甘露聚糖抗原的多克隆抗体。

背景技术

白色念珠菌是一种条件致病念珠菌，人体在正常情况下不会受到白色念珠菌的感染，只有机体免疫功能或一般防御力下降或正常菌群相互制约作用失调时，可能感染白色念珠菌，引起深部感染，甚至全身散播性感染。

近年来由于人口老龄化，免疫抑制剂及广谱抗生素的大量应用，艾滋病、恶性肿瘤发病率的增加，器官、骨髓移植及介入治疗的广泛开展，临床上侵袭性念珠菌感染的发病率呈逐年上升趋势。由于缺乏有效的诊断方法，侵袭性念珠菌感染后易造成漏诊、误诊而延误治疗，因此，发展早期、快速且特异的侵袭性念珠菌感染诊断学方法成为临床上迫切需要解决的问题。

目前临床对于侵袭性念珠菌感染常规的诊断方法主要包括以下几种：

(1)组织病理学诊断方法

在组织切片中找到病原念珠菌是确诊的“金标准”，有念珠菌侵袭和相应的炎症反应与组织损害或组织标本念珠菌培养阳性即可确定念珠菌感染的诊断。但组织病理学检查取材需要侵入性操作，重症患者难以耐受，可行性差。其敏感性受到取材的影响，一次切片未必能够找到念珠菌成分，且侵袭性念珠菌感染可引起各种各样的组织反应，给诊断带来较大困难。

(2)直接镜检和培养

直接镜检是念珠菌学检查最经典的方法，具有简便、快速、实用的优点，可以在显微镜下直接观察念珠菌形态。但直接镜检阳性率较低，阴性结果不能排除诊断，且同一菌属内的多种念珠菌镜下形态相似，对于菌种鉴定没特别的帮助。而培养检查需要结合菌落特征、生化试验等进行详细观察，培养过程耗时长，有时需要数周时间重复多次接种才能得出正确结果，且敏感性和阳性率较低，同时对操作人员的技术经验要求高，不利于早期诊断。

(3)影像学检查

动态影像学检查对提示诊断具有重要作用，胸部CT扫描，特别是高分辨率CT的临床应用对早期诊断价值较高。但影像学检测特异性较差，接合菌、镰孢菌、放线菌、奴卡菌、金黄色葡萄球菌等血管侵袭性感染在影像学上可能与侵袭性真菌相似，所以影像学检查通常只能作为辅助诊断手段。

甘露聚糖(mannan)是白色念珠菌细胞壁的主要抗原成分。对于白色念珠菌感染的诊断，除了传统的培养方法，测定血清中白色念珠菌甘露聚糖抗原，逐渐成为白色念珠菌早期诊断的简单、快捷的方法。

免疫检测技术是利用抗原抗体间能特异性结合反应，通过检测标记在反应物上的标记物，对抗原或抗体实现定性或定量检测的方法。根据标记物质的不同，分为酶联免疫分析技术(Enzyme-Linked Immunosorbant Assay，ELISA)、免疫荧光检测技术、化学发光免疫分析技术、免疫微球技术、免疫胶体金技术等。其中ELISA技术具有操作简单，灵敏度高，检测时间短的特点，在临床检测和科学研究中被广泛使用。

而测定抗原作为白色念珠菌感染诊断方法的关键，便是得到针对白色念珠菌甘露聚糖抗原的抗体。所以，迫切需要一种方法能够制备针对白色念珠菌甘露聚糖抗原的多克隆抗体。

本发明详细描述

本发明的目的在于提供一种制备针对白色念珠菌甘露聚糖抗原的多克隆抗体的方法。

本发明所采用的白色念珠菌购买自中国医学微生物菌种保藏管理中心。

本发明技术方案如下：

步骤：

1.提取白色念珠菌甘露聚糖抗原。

2.将白色念珠菌甘露聚糖抗原免疫动物。

3.从经免疫的动物中分离、纯化抗血清，得到针对白色念珠菌甘露聚糖的多克隆抗体。

本发明中，步骤1所使用的抗原为天津贻诺琦生物工程有限公司专有技术提取(提取方法见专利201110240946.1)。

步骤2中，免疫方法的选择是多种多样的，如背部皮下多点注射法、腹腔注射法等，免疫剂量可为0.3-2mL/只，并且用于制备白色念珠菌多克隆抗体的动物可为兔、鸡、鼠、羊、马、猪或驴。

步骤3中，为了得到效价较高的抗体，还应每隔7-10天测定免疫动物抗血清的抗体效价，当抗体效价达到最大值时，可从经免疫的动物中分离、纯化抗血清；所述纯化抗血清的方法可为饱和硫酸铵盐析沉淀法和/或亲和层析法。

用上述方法制备的白色念珠菌多克隆抗体是本发明所要保护的。

本发明的多克隆抗体可用于白色念珠菌抗原的免疫检测中。使用的技术可以为ELISA技术、免疫胶体金技术、化学发光免疫测定技术等免疫学检测技术。