[发明专利]胱氨酸蛋白酶抑制剂C检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种医学检测试剂盒，具体涉及一种运用胶乳增强免疫比浊法测定人血清中胱氨酸蛋白酶抑制剂C的试剂盒。

背景技术

胱氨酸蛋白酶抑制剂C(cys-c，分子量13kD)，简称胱抑素C，是半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族中的一员。在人体组织，器官中几乎所有的有核细胞都会生产胱氨酸蛋白酶抑制剂C。由于该蛋白质分子量小，在正常的肾脏中，它能够自由地通过肾小球膜被滤出，然后近乎全部地被肾脏近端小管上皮细胞重吸收和分解。因此，可以通过血液中胱抑素C的浓度来反映肾小球的过滤速率。而且，胱抑素C血清浓度不受敏症过程、性别、年龄和肌肉重量影响的特点使它成为一种优于血清肌酐和β₂-微球蛋白的反应肾小球过滤速率的理想的内源性标记物。最近，大量研究表明血清胱抑素C是一种能比血清肌酐更好的反映出肾小球过滤速率的标记物，从而用来早期诊断肾脏疾病。检测血清中胱抑素C浓度的方法包括有酶联免疫法，免疫比浊法，放射免疫法，荧光免疫测定法等，但是除了上述的测定方法外，现今应用最多的就是胶乳增强免疫透射比浊法，其原理是将抗体通过化学交联或者物理吸附的方法标记在表面带有羧基或没有带羧基的聚苯乙烯胶乳颗粒上，抗体和待测物中相应的抗原结合形成复合物后，使包被抗体的胶乳颗粒之间发生凝集。胶乳凝集的越多，越会阻碍光线的透过性，反应液的吸光度就越大。所以，反应液吸光度的大小和胶乳颗粒凝集程度是成正比的，更近一步地来说，待测物中抗原的浓度是和反应吸光度成正比的。由此采用胶乳颗粒增强的免疫透射比浊法来测定血清中胱抑素C的含量。

该胶乳增强免疫透射比浊法可以通过物理吸附法把多克隆抗体标记在不带羧基的聚苯乙烯胶乳颗粒上，但是采用物理吸附法得到的致敏胶乳颗粒稳定性比较差，而且物理吸附的效果也不好，很容易会造成抗体从胶乳颗粒表面脱落。为了避免上述的物理吸附的弱点，目前通过化学交联法把抗体标记在表面带羧基的胶乳颗粒上。通过化学共价交联，抗体和胶乳的结合力更强，有抗体包被的胶乳颗粒稳定性更高。通过上述化学交联方法制备的检测试剂盒，会造成灵敏度高，特异性好、准确性高、抗干扰能力高及生产成本低的优点。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种空白吸光度低；检测灵敏度，准确度高；精密度好，检测范围内线性好，稳定性好；生产成本低的胱氨酸蛋白酶抑制剂C检测试剂盒。

本发明所采用的技术方案为：

一种胱氨酸蛋白酶抑制剂C检测试剂盒，该试剂盒包括试剂R1、试剂R2，所述试剂R1为促进抗体抗原特异性结合的反应液；所述试剂R2是抗人胱抑素C抗体包被的聚苯乙烯胶乳颗粒混合物，置于适当的缓冲液中。本发明上述试剂盒中试剂R1与试剂R2的容积比为5∶1。

所述试剂R1的各组分及浓度范围为：

作为优选，所述试剂R1的各组分及浓度范围为：

作为进一步优选，所述试剂R1的各组分及浓度范围为：

作为优选，所述试剂R2中的缓冲液为甘氨酸。

所述试剂R1和试剂R2中甘氨酸的pH值为5.5-8.5，进一步优选为6.5-7.5。

作为优选，所述试剂R2中聚苯乙烯胶乳颗粒混合物为大、小两种直径的聚苯乙烯胶乳颗粒的混合物(该聚苯乙烯胶乳颗粒为市售常规产品)，大直径聚苯乙烯胶乳颗粒平均粒径为130nm～300nm，小直径聚苯乙烯胶乳平均粒径为20nm～60nm，其中聚苯乙烯胶乳颗粒混合物的含量为0.1～0.5％，大直径聚苯乙烯胶乳颗粒∶小直径聚苯乙烯胶乳颗粒＝8～9∶2～1。

本发明上面所述的大直径胶乳颗粒，其平均粒径在130nm～300nm之间，小直径胶乳颗粒，其平均粒径在20nm～60nm之间，在制备试剂的过程中，使用超滤的方法以达到清洗胶乳和置换缓冲液的目的。对于大直径胶乳颗粒来说，优点是胶乳表面积跟自身体积的比率小，很容易在表面包被的抗体和抗原形成复合物后产生明显的凝集现象，从而导致吸光度的变化。因此能测得浓度比较低的分析物。缺点是由于表面积跟自身体积比率小的原因，单位体积内表面羧基含量少，造成单位体积内抗体包被量小，很容易造成抗原过剩的结果。因此很难测浓度高的分析物。小直径胶乳表面积跟自身体积比率大，对测量结果的影响刚好和大胶乳相反。所以本发明在制备试剂盒过程中，选用大小两种胶乳颗粒的混合物，这样能使试剂的空白吸光度低，灵敏度高，线性好。

本发明上面所述抗人胱抑素C抗体为兔抗人胱抑素C多克隆抗体。