[发明专利]硝酸纤维素膜富集体液蛋白质组蛋白的用途

说明书

技术领域

本发明涉及硝酸纤维素膜(nitrocellulose filter membrane，简称NC膜)的新用途，特别是硝酸纤维素膜富集体液，尤其是血清、血浆、尿液、脑脊液、组织液中的蛋白质组蛋白的新用途。

背景技术

本领域技术人员熟知硝酸纤维素膜(nitrocellulose filter membrane，简称NC膜)在胶体金试纸中用做C/T线的承载体，同时也是免疫反应的发生处。NC膜是生物学试验中最重要的耗材之一。其中它主要用于分子杂交。杂交技术有固相杂交和液相杂交之分。固相杂交技术目前较为常用，其中先将待测核酸结合到一定的固相支持物上，再与液相中的标记探针进行杂交。固相支持物常用硝酸纤维素膜。

NC膜是人类研究最早的微滤膜之一，至今己有百年的历史。NC属于纤维素衍生物的一种，有一定亲水性但不溶于水，可溶于有机溶剂，如丙酮，微溶于醇类，对核酸等大分子物质具有非特异性吸附作用。在生物学上的应用主要有酶联免疫斑点实验，分离DNA、RNA、内毒素、蛋白质等生物大分子物质，Southern斑点实验，Western斑点实验等。NC膜对蛋白质的吸附力分为两部分，即离子作用力和非离子作用力，主要来源于三种作用：(1)载体上所带的硝基所引起的永久偶极距与蛋白质分子上所带的极性基团所引起的多种静电吸附力，(2)氢键，(3)疏水作用力[1]。

近年来蛋白质组学技术取得了很大进展，体液蛋白质组学由于包含了大量关于机体健康的信息，在临床上具有重要的影响，其中尿液蛋白质组学是体液蛋白质组学的一个重要组成部分。尿液采集简便易行，其中富含多种蛋白及小分子多肽，可以反映肾脏、膀胱、前列腺及其他系统的生理功能和疾病状态[2-4]。在疾病状态时，可能存在着尿蛋白量和尿蛋白成分的异常。因此，完全有可能将尿中出现的一些特殊蛋白成分作为特异性的“生物标志物”(biomarker)，用于诊断疾病或监测疾病的进程。

现有技术中富集尿蛋白的方法包括有机溶剂沉淀法、超速离心法、冻干法和超滤法等[5]。但是，现有的蛋白提取方法较为繁琐，大量的样品长期储存需占用较大空间。为了克服现有技术的不足之处，本发明探索用硝酸纤维素(nitrocellulose，NC)膜收集蛋白使之应用于临床蛋白质组学研究。

发明内容

因此，本发明的第一方面涉及一种硝酸纤维素膜在制备富集体液蛋白质组蛋白膜制品中的应用，优选地，体液蛋白质组中至少一半种类的蛋白均被富集在硝酸纤维素膜上，更优选地，体液蛋白质组中全部种类的蛋白的60％、70％、80％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％均被富集在硝酸纤维素膜上，更优选地，体液蛋白质组中全部种类的蛋白的95-100％均被富集在硝酸纤维素膜上，最优选地，体液蛋白质组中全部种类的蛋白的100％均被富集在硝酸纤维素膜上；优选地，体液蛋白质组中的蛋白均以其天然含量成比例富集在硝酸纤维素膜上；优选地，体液蛋白质组蛋白中的白蛋白以相当于其天然存在比例更少的比例被富集。

优选地，所述的体液蛋白质组蛋白包括尿液蛋白质组蛋白、血浆蛋白质组蛋白、血清蛋白质组蛋白、脑脊液蛋白质组蛋白和组织液蛋白质组蛋白。

优选地，所述的体液蛋白质组蛋白包括将体液一次性通过硝酸纤维素膜所得的蛋白，或者将体液循环通过硝酸纤维素膜所得的蛋白，优选地，体液一次性通过硝酸纤维素膜的流速无限制，更优选地，该流速为0.1ml/min～1000ml/min，优选地，体液循环通过硝酸纤维素膜的循环时间在15小时以下，优选地，体液在0～10℃下通过硝酸纤维素膜，更优选地，体液在冰浴条件下通过硝酸纤维素膜；优选地，所述体液在通过硝酸纤维素膜前通过低速离心预先去除不溶物。

优选地，所述的硝酸纤维素膜的孔径和孔径均一度无特殊要求，优选孔径为0.22μm或0.4μm；优选地，所述硝酸纤维素膜单层使用或多层叠加或多层分隔使用；优选地，硝酸纤维素膜的边缘形状无特殊要求，以能与配套容器配合使用、让体液仅通过硝酸纤维素膜膜孔通过为限。