[发明专利]miRNA-122抑制剂在制备治疗先天性心脏病的药物中的应用

说明书

(一)技术领域

本发明涉及miRNA-122抑制剂在制备治疗先天性心脏病的药物中的应用。

(二)背景技术

非编码小分子RNA(miRNAs)是小分子量和内源性的RNA，调节基因的表达。miRNA可与靶mRNA分子的3’非编码区(3′-UTR)互补序列结合，通过抑制mRNA的翻译或直接使mRNA降解，在转录后水平达到基因沉默效果。研究发现miRNA不仅在发育调控、细胞增殖与凋亡、造血过程等方面发挥作用，并且对心脏的发生发育同样有重要影响，miRNA在心脏存在高表达。

先天性心脏病(CHD)影响世界上1％的新生儿并且具有高发病率和死亡率特别是在1岁之内的婴幼儿。先天性心脏病是一类常见的先天缺陷，约占人类所有先天缺陷的25％。室间隔缺损(VSD)作为最常见的先天性心脏病，其发病机制和致病因素仍未阐明。Pax-8基因属于哺乳类Pax蛋白家族的转录因子，这一基因家族编码的蛋白质都含有成对的结构域，一个保守的八肽和同源配对形式。这是一种核蛋白，参与甲状腺滤泡细胞的发育和甲状腺特异性基因的表达。Pax-8基因敲除小鼠有多种形式的心脏缺陷，特别是类似室间隔缺损和左心室扩大呈球形，其左心室壁和室间隔的细胞凋亡增加，此外，Pax-8基因在体外下调后细胞凋亡增加。因此，研究miRNA是否参与Pax-8基因敲除小鼠心脏结构发育的异常，可为VSD治疗药物筛选提供基础。

(三)发明内容

本发明目的是提供miRNA-122抑制剂在制备治疗先天性心脏病的药物中的应用。

本发明采用的技术方案是：

miRNA-122抑制剂在制备治疗先天性心脏病的药物中的应用。

所述miRNA-122抑制剂用于制备治疗室间隔缺损的药物。

所述药物通过抑制或降低miRNA-122表达来达到降低心肌细胞凋亡的作用。

所述miRNA-122抑制剂的RNA序列如下：5′-CAAACACCAUUGU CACACUCCA-3′。

近年的研究发现，脊椎动物中存在很多miRNA，其在个体发育过程中，尤其是在细胞发育过程中起着重要的作用，同样的miRNA在心肌损伤和凋亡的过程中也发挥了重要作用。Pax是机体内重要基因家族，其蛋白是一种重要的转录调节因子，在胚胎组织和器官的分化发育过程中起着重要的作用。Pax-8是哺乳类Pax家族的一员，Pax-8基因的表达具有组织的特异性，其基因敲除小鼠具有甲状腺发育不良和甲状腺功能低下。发明人之前研究发现Pax-8敲除小鼠模型其心脏出现室间隔缺损，电镜均显示左室壁和室间隔部位存在大量凋亡心肌细胞，细胞内线粒体数量明显增多，体积明显减小，因此Pax-8敲除小鼠可作为VSD药物筛选的模型用于新药的筛选研究。

本申请人通过研究miRNA-122表达对Pax-8基因敲除小鼠心肌细胞凋亡的影响发现，miRNA-122可能是VSD治疗的一个新基因靶点，有选择的调节miRNA-122表达，可以影响整个基因网络，从而影响复杂的疾病表型。因此，miRNA-122抑制剂有望作为VSD治疗的新药物，广泛应用于先天性心脏病的防治。

本发明的有益效果主要体现在：本发明发现了VSD治疗的一个新基因靶点，提供了miRNA-122抑制剂在制备治疗先天性心脏病尤其是室间隔缺损的药物中的新用途，为新药筛选提供了基础。

(四)附图说明

图1为pax-8基因敲除小鼠鉴别；A和B为Pax-8 KO^-/-条带；C为Pax-8 KO^+/-条带；D为野生型小鼠条带；

图2为HE染色观察Pax-8基因敲除纯合子与杂合子小鼠心脏形态；A：箭头所指为Pax-8^-/-小鼠的心脏室间隔缺损处(×400)；B：Pax-8^+/-小鼠的心脏基本上正常(×400)；

图3为电子显微镜观察Pax-8基因敲除纯合子与杂合子小鼠心脏；A：Pax-8KO^-/-小鼠左心室壁细胞凋亡(6200×)；B：Pax-8KO^-/-小鼠左心室壁细胞线粒体数量增加，但形态变小(17500×)；C：Pax-8 KO^+/-小鼠左心室壁细胞线粒体未见明显异常(17500×)；D：Pax-8 KO^-/-小鼠左心室壁细胞线粒体全景图(3700×)；