[发明专利]一种荧光定量RT-PCR检测人类免疫缺陷病毒1型的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种荧光定量RT-PCR检测人类免疫缺陷病毒1型的试剂盒，特别是涉及以一步法实时荧光逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术快速、定量检测人类免疫缺陷病毒1型感染的试剂盒。本试剂盒具有很高的灵敏度和特异性，通过本发明的试剂盒实现对血清或血浆样本中人类免疫缺陷病毒1型核酸RNA进行定量检测，适用于人类免疫缺陷病毒1型感染的辅助诊断和人类免疫缺陷病毒1型感染者药物治疗的疗效监测。

背景技术

人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)是获得性免疫缺陷综合症(acquired immunodeficiency syndrome，AIDS)的病原体。HIV是1983年法国巴斯德研究所Montagnier等首次从一例慢性淋巴结肿大的男性同性恋病人的血液中分离得到的一株新逆转录病毒。次年，美国Gallo等也从AIDS患者体内分离得到相似的逆转录病毒，根据分子病毒学研究分析证明，二者是同一病毒的不同变种。1986年，国际病毒分类委员会将他们命名为HIV。HIV主要有两型，包括HIV-1和HIV-2。两型病毒的核苷酸序列相差超过40％。全世界的AIDS大多由HIV-1所引起，HIV-1起源于中非，以后扩散到地中海、欧美及亚洲地区，而HIV-2只在西非呈地区性流行。目前艾滋病已成为威胁全球，尤其是亚洲和非洲等广大发展中国家人民生命健康安全的主要疾病之一。因此，早期检测出HIV的感染对相关疾病的治疗和预后有着重要的意义。

HIV病毒株呈球形，直径约100-120nm，电镜下病毒内部有一致密的圆柱状核心。病毒外层为脂蛋白包膜，其中镶嵌有gp120和gp41两种病毒特异的糖蛋白。病毒内层为20面体对称的核衣壳，由病毒结构蛋白组成。病毒核心含有病毒RNA，逆转录酶和核衣壳蛋白。HIV的基因结构与其它逆转录病毒基本相同，为RNA双分子，由2条相同的正股RNA链在5’端通过部分碱基互补配对而形成双聚体。病毒基因组由9749个核苷酸组成，含有3组共9个基因(gag、pol、env、tat、rev、nef、vif、vpu和vpr)。在病毒基因组的5’端和3’端各有一段相同的核苷酸序列，成为长末端重复序列(long terminal repeat，LTR)，含有起始子、增强子、TATA序列，以及多个与病毒及细胞调节蛋白反应的区域，对病毒基因组转录的调控起关键作用。

联合国艾滋病规划署公布的《2008年全球艾滋病流行状况报告》显示，2008年全球大约有3340万艾滋病病毒感染者，270万新发感染者，200万人死于艾滋病。其中，大约有43万新生儿感染艾滋病病毒，15岁以下儿童艾滋病病毒感染者的总数达到210万；年轻人占所有成年人(15岁以上)新发感染的40％。即使是随着医学技术等发展使艾滋病传播得到有效控制，但目前该病尚无法治愈，也无有效疫苗。艾滋病的广泛流行，主要是由HIV病毒引起的。因此，HIV感染的实验室诊断是艾滋病预防控制工作的重要组成部分，只有发现传染源才能更有效地控制艾滋病传播。艾滋病能通过血液、精液和宫颈分泌物传播，其他体液如唾液、脑脊液、泪液、尿液、乳汁中曾分离到HIV，但不是主要的传播途径。典型AIDS病程一般1.5～2.5年，发烧、疲劳、淋巴结肿大、持续腹泻、咳嗽、气短、皮疹、淤血斑、中枢神经系统疾病，各种感染，包括寄生虫病、细菌、深部真菌、病毒。AIDS患者由于免疫功能缺陷而发生肿瘤、如卡波剂氏肉瘤、淋巴瘤等。HIV感染后经5年有10％发展成AIDS，30％为AIDS相关综合征，60％为无症状带毒者，这给AIDS的预防带来困难，估计感染后10年有50％发展为AIDS，该病在5年内死亡率均在90％，多在临床症状出现后2年之内死亡。

HIV感染的病毒学诊断技术一般包括病毒分离和病毒成份(如抗原、核酸)的检测。早期对HIV的诊断主要是通过血清学试验检测抗HIV的抗体，间接地诊断HIV感染，目前国外用于HIV抗体筛查的方法很多，根据检测原理不同分为酶联免疫吸附法、凝集法和层析法，可对血液、唾液和尿液标本进行常规或快速检测。在实际工作中常用的有酶联免疫吸附试验(ELISA)、明胶凝集试验和各种快速诊断试剂。近几年，分子生物学方法不断被应用到HIV的检测中，HIV的实验室诊断方法取得了很大的进展，HIV核酸定性检测可用于HIV感染的辅助诊断，如窗口期辅助诊断、病程监控、指导治疗方案及疗效测定、预测疾病进程等。核酸检测已经成为了HIV实验室诊断的发展方向。