[发明专利]一种新颖的粒细胞制备及其抗癌活性检测方法

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一种分离纯化粒细胞的方法，特别是一种新型的不损伤粒细胞活性的制备方法与抗癌活性检测方法(cancer-killing assay，CKA)。 

(二)技术背景

目前，癌症已成为人类健康的第一杀手，夺走了千千万万人的宝贵生命。根椐世界卫生组织最新资料显示，在全球近66亿人口中，每年新发肿瘤病人约有1000万，约有500多万人死于癌症，几乎每6秒钟就有一名癌症患者死亡。 

它的可怕性不仅在于疾病对患者机体组织的严重破坏和癌症患者的高死亡率，而且在于传统疗法，如放疗、化疗等带来的难以忍受的副作用。国内外对治疗癌症的研究虽然取得了阶段性成果，但治疗癌症的方法和效果还是不尽如人意，仍然无法找到对癌症形成有效杀伤、清除和减低副作用的治疗方法。 

1999年，我公司首席科学家崔征教授及其研发团队意外发现了一只具有超强抗癌活性的小白鼠。这只小白鼠经受了大量多种恶性程度极高癌细胞的考验并保持了完美健康及超强的生育能力。而且这种天然抗癌能力由遗传因素决定并以显性方式传代。更为意外的发现是，这种天然抗癌能力完全是由自然免疫体系里的粒细胞和巨噬细胞执行的。迄今这只小白鼠已繁殖了几千只具有同样抗癌活性的子孙后代。将抗癌小鼠的粒细胞提供给患晚期癌症小鼠后，患晚期癌症小鼠痊愈，取得了极佳疗效。 

通过抗癌小白鼠的提示，崔教授及其团队近年来对人群进行了大量的研究并发现一部分健康年青人的粒细胞内也天然存有类似的超强抗癌活性。粒细胞是人体循环血里白血球中的主要成分，约占白血球总数的50％-70％。传统观念认 为粒细胞的功能只限于抗细菌。崔教授的发现显示粒细胞可为人体提供天然免疫监控。粒细胞可以不断及时清除新产生的癌细胞。癌症的产生很可能是由于粒细胞免疫监控活性降低使癌细胞得不到及时清除而大量堆积。粒细胞对癌细胞有极高的靶向性和鉴别能力。这种天然的鉴别能力并不是基于细胞表面的化学结构而是基于细胞表面的电荷。粒细胞的杀伤力是来自于胞浆颗粒中的正电多肽。粒细胞的靶向是带负电荷的细胞膜。因为几乎全靠大量葡萄糖无氧酵解，癌细胞产生并释放大量乳酸。大量乳酸的释放会导致癌细胞表面丢失大量正电荷而显负电。正常细胞由于靠葡萄糖有氧降解来产生细胞能量从而表面显电中性。粒细胞识别靶细胞后，即释放正电多肽在靶细胞膜上打孔从而杀死靶细胞。 

据此科研成果，崔征教授发明并提出了提高抗癌免疫力的独特方法——“粒细胞成分输血提高抗癌免疫力疗法”，我们称之为“粒福特疗法”。全新概念的疗法可利用新开发的检测技术-CKA去寻找有超级抗癌活性的健康人供体。然后用成分采血成分输血的方法把有特异抗癌活性的粒细胞输给病人进行治疗。 

粒细胞天然抗癌活性的检测方法及原理参见附图1。 

粒细胞天然抗癌活性的检测方法及原理 

(三)发明内容

众所周知，粒细胞是固有免疫系统和细胞免疫系统中的一个重要组成成分，具有抗癌活性，活性高的粒细胞能够杀死癌细胞，而很多人粒细胞抗癌活性降低，抗癌免疫力不足，因而患上癌症。通过我公司自主研发的新技术，制备得到高纯度的粒细胞，严格筛选出健康人具有杀死癌细胞能力的粒细胞。(和病人配型成功后，再将粒细胞以成分输血的方式输入癌症患者体内，粒细胞进入癌症患者体内后，就会发挥自己的功效，对癌细胞进行靶向性追杀，好似精确制导导弹一般对癌细胞进行“制导式轰炸”，从而达到杀死癌细胞的作用。) 

本发明的目的是提供一种分离纯化粒细胞的方法。 

本发明的另一目的是提供一种新颖的粒细胞抗癌活性的检测方法。 

本发明的再一目的是提供CKA的用途。 

在本发明的第一方面，提供了一种分离纯化粒细胞的方法，该方法的制备工艺流程见附图2。 

具体叙述如下：(1)采集健康成年人外周血2ml；(2)于冰盒中迅速送至CKA检测中心；(3)按照全血∶沉淀液(LIFT-001)＝5∶1(v/v)的比例加入沉淀液；于-4℃静置10分钟；(4)使用新颖的细胞分离纯化液LIFT-002，用纯化水配制成3个不同的浓度，将上清转移至新的预先加有分离纯化液的15ml离心管中；5000g离心60分钟；(5)取白膜层。 

技术路线如下： 

1.沉淀红细胞 

使用本公司自制的沉淀液(LIFT-001)，按照血液∶沉淀液＝5∶1(v/v)的比例混合，静置90分钟。期间摇晃3次。 

2.配制分离纯化液