[发明专利]一种构建泡沫细胞模型检测食用菌中降血脂有效成分的方法

权利要求书

1.一种构建泡沫细胞模型检测食用菌中降血脂有效成分的方法，包括以下步骤：

（1）构建泡沫细胞模型：对巨噬细胞RAW264.7进行24孔板种板，毎孔接种量为2*10⁴个处于对数期的细胞，培养至细胞贴壁率达到60—80%时进行分组，分别设置正常组，模型组，正对照组和加药组；

正常组为贴壁率达到60—80% 正常巨噬细胞RAW264.7继续培养24 h；

模型组为在贴壁率达到60—80% 的RAW264.7巨噬细胞中加入终浓度为70 μg/mL的氧化低密度脂蛋白进行诱导，继续培养24 h后形成泡沫细胞；

正对照组为贴壁率达到60—80% 的巨噬细胞中同时加入终浓度为70 μg/mL的氧化低密度脂蛋白和终浓度为100ug/mL的辛伐他丁继续培养24 h；

药物组为贴壁率达到60—80% 的巨噬细胞中同时加入终浓度为70 μg/mL的氧化低密度脂蛋白和终浓度和终浓度依次为50 μg/mL、100 μg/mL、200 μg/mL的浓度梯度的目的药物继续培养24 h；

（2）细胞泡沫化程度的形态学观察：培养24h后，吸去培养基用PBS 冲洗细胞数次，中性甲醛固定30 min 后加入油红O 染液，37℃染色10 min，60%异丙醇脱色后进行倒置显微镜观察并拍照；

（3）泡沫细胞脂流出的检测：12孔板按每孔2×10⁴细胞数接种巨噬细胞RAW264.7，细胞融合达70-80% 按上述第（1）步骤中方法分组为正常组、模型组、正对照组、药物组，弃掉陈旧培养基，换成10% 无脂蛋白血清的DMEM培养基培养，继续培养24 h后进行脂流出的检测。

2.根据权利要求1所述的构建泡沫细胞模型检测食用菌中降血脂有效成分的方法，其中所述脂流出检测的方法是：培养24h后用PBS洗板3次，每次1mL/孔；每孔中加入1mL的PBS，细胞刮小心刮取，转移细胞混悬液入相应的玻璃管，室温，离心，800 rpm，2 min；移走上面PBS，迅速加入体积比3:2的己烷:异丙醇溶液，900μL/每孔，提脂，室温放置30 min；将溶液平均分两份分别移入4 mL的EP管中，一份用于测定游离胆固醇，一份用于测定总胆固醇；总胆固醇减去游离胆固醇得到胆固醇酯。