[发明专利]用于扩增免疫球蛋白轻链CDR3序列的引物集及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域。具体地，本发明涉及用于扩增免疫球蛋白轻链CDR3序列的引物集及其用途。更具体地，本发明涉及用于扩增免疫球蛋白轻链CDR3序列的引物集，扩增免疫球蛋白轻链CDR3的方法，富集免疫球蛋白轻链CDR3序列的方法，构建免疫球蛋白轻链CDR3序列的测序文库的方法，确定免疫球蛋白轻链CDR3序列的序列信息的方法，确定个体免疫状态的方法，确定个体免疫状态的系统。

背景技术

免疫球蛋白、T细胞受体和HLA(人类白细胞抗原)是人类基因组中最活跃的分子，决定和反映了人和环境的相互作用。免疫大分子的多样性使得机体能识别无数的外来物质和清除体内产生的部分代谢物。免疫大分子多样性产生的机制主要有基因重排、体细胞突变、非模板核苷酸的插入与缺失等。免疫球蛋白重链重排指V、D、J三种基因片段重排形成多种CDR3序列，首先是DJ基因片段重排，重排后的基因片段再与V基因进行组合，得到编码CDR3的基因；在免疫球蛋白轻链中，先进行κ链基因重排，若重排失败，则λ链基因开始重排，由重排、非模板核苷酸的插入与缺失等机制产生多种多样特异性的基因片段。由此，一个个体内可能产生10¹¹个特异性的分子。免疫系统是机体抵御病原菌入侵与免疫调节的重要系统，对其研究有很重要的意义。

然而，目前对于CDR3的研究仍有待改进。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种能够有效地对免疫球蛋白轻链CDR3序列进行富集的手段。

根据本发明的一个方面，本发明提出了一种用于扩增免疫球蛋白轻链V-J重排序列的引物集。根据本发明的实施例，该引物组合物包括正向引物组，所述正向引物组由至少一种V区引物组成，所述至少一种V区引物的每一种均包含与至少一个V基因片段互补的序列；以及反向引物组，所述反向引物组由至少一种J区引物组成，所述至少一种J区引物的每一种均包含与至少一个J基因片段互补的序列。利用该引物集，能够有效地对免疫球蛋白轻链V-J重排后产生的各种CDR3序列进行富集，从而为对CDR3多态性的深入研究提供了便利的工具。

在本发明的另一方面，本发明提出了一种扩增免疫球蛋白轻链V-J重排的方法，利用前面所述引物集，多重PCR同时扩增V_κ-J_κ和V_λ-J_λ重排或者任一种重排。

在本发明的又一方面，本发明提出了一种构建免疫球蛋白轻链CDR3序列的测序文库的方法。包括以下步骤：根据前面所述的方法，获得富集所述免疫球蛋白轻链CDR3序列的扩增产物；以及针对所述扩增产物，构建DNA测序文库，所述DNA测序文库构成所述免疫球蛋白轻链CDR3序列的测序文库。由此，可以在对轻链CDR3序列进行富集的基础上，构建可以用于测序的测序文库。

根据本发明的再一方面，本发明提出了一种确定免疫球蛋白轻链CDR3序列的序列信息的方法。根据本发明的实施例，该确定免疫球蛋白轻链CDR3序列的序列信息的方法包括以下步骤：根据前面所述的方法，构建免疫球蛋白轻链CDR3测序文库；以及对所述免疫球蛋白轻链CDR3测序文库进行测序，以便确定所述免疫球蛋白轻链CDR3序列的序列信息。

本发明再一方面提出了一种确定个体免疫状态的方法。根据本发明的实施例，该确定个体免疫状态的方法包括以下步骤：根据前面所述的方法，对所述个体的免疫球蛋白轻链CDR3序列进行测序，以便获得由多个测序数据构成的测序结果；以及基于所述测序结果，确定所述个体的免疫状态。通过该方法，能够有效地获得个体的免疫球蛋白轻链CDR3序列的序列信息，从而可以有效地确定个体免疫状态。