[发明专利]一种甲鱼系统性败血症球状病毒灭活疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种甲鱼系统性败血症球状病毒灭活疫苗，其特征在于：本疫苗含有保藏号为CGMCC No.5378的经灭活的甲鱼系统性败血症球状病毒。

2.一种根据权利要求1所述的甲鱼系统性败血症球状病毒灭活疫苗的制备方法，其特征在于步骤如下：

（1）病毒纯化

取患系统性败血症的甲鱼，将发病甲鱼内脏组织剪碎，按质量体积比1g：10ml比例将甲鱼内脏加入到TNE缓冲液中，于4℃下，8000r/min离心20min后，取上清液于4℃下，35000g离心1h；然后取底部核心部位白色沉淀，重悬于5mlTNE缓冲液中，4℃冰箱冰浴过夜，将过夜的沉淀轻轻吹打均匀，于4℃下，8000r/min离心20min，取上清液于4℃下，35000g离心1h，得到的白色沉淀即为纯化病毒；

（2）抗原灭活

将步骤（1）得到的纯化病毒用0.9%无菌生理盐水稀释到病毒蛋白终浓度0.5-1mg/ml，然后加入终体积0.5%的福尔马林于37℃恒温水浴锅灭活24h，每2-3h进行振荡混匀，得到无菌的灭活病毒；

（3）乳化

将步骤（2）得到的灭活病毒与弗式完全佐剂按体积比1：1混合后，于4℃间歇振荡乳化6-8h得到甲鱼系统性败血症球状病毒灭活疫苗。

3.根据权利要求2所述的一种甲鱼系统性败血症球状病毒灭活疫苗的制备方法，其特征在于：所述的TNE缓冲液配制方法：Tris 3.0289g、NaCl 6.00g、EDTA 0.9306g 补足双蒸水至500ml，调整pH 7.6，高压灭菌，4℃冷藏备用。