[发明专利]蛇毒来源的细胞毒素-CTX1在制备抗急性白血病药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种蛇毒来源的细胞毒素-CTX1，尤其涉及蛇毒来源的细胞毒素-CTX1在制备抗急性白血病药物中的应用。

背景技术

白血病又称“血癌”，是造血组织的恶性疾病，其特征为白细胞在骨髓及其他造血组织中呈恶性、无限制地增生，进而浸润全身各组织和脏器，对机体产生严重损害。根据细胞的成熟度和自然病程，白血病可分为急性白血病和慢性白血病两大类。

急性白血病根据细胞类型又分为急性淋巴细胞性白血病和急性非淋巴细胞性白血病两大类。急性非淋巴细胞性白血病又称急性髓细胞白血病(acute myelocytic leukemia，AML)，它是多能干细胞或已轻度分化的前体细胞核型发生突变所形成的一类疾病。急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia，APL)是AML的一种特殊类型，而人前髓细胞(HL-60)是一种急性早幼粒白血病细胞系，其不表达多药耐药蛋白P-gp和MRP，对化疗药物较敏感。

KG1a是一种高表达不成熟的CD34+表型的人急性髓系白血病细胞系，研究证实此细胞系中存在有肿瘤干细胞样生物学特性的亚群细胞，对多种化疗药物易耐受，至今对其治疗尚无突破性进展，因此寻找对KG1a细胞敏感有效的药物成为亟待解决的问题。

以往的研究表明，中华眼镜蛇毒组分(NNAVC)对人急性髓系白血病细胞株KG1a细胞有显著细胞毒性，能诱导KG1a细胞凋亡，其机制与Bcl-2表达下调和Bax表达上调有关。

中华眼镜蛇又称舟山眼镜蛇(Naja atra Cantor)，以颈背部有白色眼镜架状斑纹为其最明显的特征，体长可达2米，主要分布于我国长江以南诸省及台湾等地。舟山眼镜蛇所分泌的蛇毒液中含有多种细胞毒素(Cytotoxin，CTX)及神经毒素(neurotoxin，NT)。从我国大陆及台湾产舟山眼镜蛇毒中至少已分离出了5～7种不同的CTX，均由60～63个氨基酸残基组成，相对分子质量为6000～7000Da。

1975年，Hayashi首次报道了从台湾产舟山眼镜蛇毒(Naja najaatra)中纯化出一种CTX，是一种强碱性多肽毒素(pI9.0)，相对分子质量为6693Da，有60个氨基酸残基：LKCNKLIPIA SKTCPAGKNL CYKMFMMSDL TIPVKRGCID VCPKNSLLVKYVCCNTDRCN，并命名为CTX1。进一步研究发现泰国眼镜蛇(Naja naja siamensis)毒中亦含此毒素。

近期研究发现，舟山眼镜蛇细胞毒素1(CTX1)可诱导慢性白血病细胞K562(人慢性粒细胞系)的凋亡和坏死。目前有关CTX1对急性白血病细胞的杀伤作用及其机制尚未见报道。

发明内容

本发明的目的蛇毒来源的细胞毒素-CTX1的新用途，即在制药中的新应用。

蛇毒来源的细胞毒素-CTX1是从蛇毒中提取的一种强碱性多肽毒素，其pI值为9.0，相对分子质量为6693Da，有60个氨基酸残基：LKCNKLIPIA SKTCPAGKNLCYKMFMMSDL TIPVKRGCID VCPKNSLLVK YVCCNTDRCN。目前，细胞毒素-CTX1可从泰国眼镜蛇(Naja naja siamensis)、中国大陆及台湾产舟山眼镜蛇(Naja atra Cantor)的蛇毒中分离出来。经实验证明，蛇毒来源的细胞毒素-CTX1可以抑制白血病细胞的增殖，尤其能够显著抑制人早幼粒急性白血病细胞HL-60和人急性髓性白血病细胞KG1a的增殖，并能诱发HL-60和KG1a细胞晚期凋亡和坏死。而CTX1导致HL-60和KG1a细胞死亡的作用可以被蛋白合成抑制剂放线菌酮(Cycloheximide，CHX)所逆转，说明CTX1引起这两种细胞的死亡为诱导性死亡。CTX1诱导HL-60细胞的死亡还可以被受体相互作用蛋白1(receptor-interacting protein 1，RIP1)的抑制剂Necrostatin-1(Nec-1)所逆转，说明CTX1能够诱导HL-60细胞发生程序性坏死(Necroptosis)，而不是通过经典的凋亡通路。

实际上，本发明涉及蛇毒来源的细胞毒素-CTX1在制备抗急性白血病药物中的应用。

进一步地，本发明涉及蛇毒来源的细胞毒素-CTX1在制备抗急性非淋巴细胞性白血病药物中的应用。

本发明涉及蛇毒来源的细胞毒素-CTX1在制备抗急性早幼粒细胞白血病药物中的应用。