[发明专利]一种从红藻角叉菜中提取化合物的提取方法

权利要求书

1.一种从红藻角叉菜中提取三磷酸腺苷的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）、将红藻角叉菜粉末置于3-5倍其质量的溶剂中冷浸提取，保证浸泡后的溶剂质量浓度为80%-90%，过滤去除藻渣，合并提取液，减压蒸干溶剂，得深绿色油状浸膏；

（2）、先后用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取提取物浓缩液；

（3）、将正丁醇相萃取物采用硅胶柱层析，用氯仿：甲醇：水=7:3:0.1进行洗脱，利用TLC薄层色谱跟踪检测，根据Rf和颜色进行分段，合并Rf和颜色相同的部分，减压浓缩得七种混合物级分C1-C7，取C2备用； 

（4）、取C2再次用硅胶柱层析，用氯仿：甲醇：水=9:2:0.1，得C2-1、C2-2、C2-3、C2-4、C2-5；经过大量的筛选，取C2-4 用Sephadex LH-20柱经氯仿：甲醇=1:1洗脱，其中C2-4c，用氯仿反复洗涤，得到白色粉末状物质。

2.一种从红藻角叉菜中提取三磷酸腺苷的方法，其特征在于上述提取过程的具体步骤如下：

（1）、将红藻角叉菜粉末置于3-5倍其质量的溶剂中常温冷浸7-10天，保证浸泡后的溶剂质量浓度为80%-90%，连续换溶剂3-5次，即进行3-5次提取；

所述的溶剂为乙醇；常温一般为20-30℃；

（2）、步骤1中的提取物过滤去除藻渣，合并上述3-5次的提取液，减压蒸干溶剂，即减压蒸干提取液中的酒精，得深绿色油状浸膏；

（3）、将步骤2得到的深绿色油状浸膏首先加水悬浮，然后用与悬浮液等量的石油醚常温萃取4-8次，合并石油醚相，减压浓缩得到深绿色浸膏；

（4）、步骤3所得的水相再加入与水相等量的乙酸乙酯常温萃取4-8次，合并乙酸乙酯相，减压浓缩得到棕黄色浸膏；

（5）、步骤4所得的水相再加入与水相等量的正丁醇常温萃取4-8次，合并正丁醇相，减压浓缩得到黄色浸膏；

    （6）、取100-200目的硅胶，110℃±5℃下活化25-35分钟，与石油醚混合，超声去气泡，然后湿法装入层析柱中，柱子尺寸：50×600mm，装柱高度：400mm，静置60-80小时；

（7）、收集步骤5中的正丁醇相萃取物，用甲醇溶解，用三倍其质量的60-100目硅胶拌样，干法上样，分别以氯仿：甲醇：水=7：3：0.1进行梯度洗脱，用50mL试管分段收集，每管收集45mL，利用TLC薄层色谱跟踪检测，根据Rf和颜色进行分段，合并Rf和颜色相同的部分，减压浓缩得七种混合物级分C1-C7；

 C1：第1-6管合并；C2：第7-19管合并；C3：第20-34管合并；C4：第35-47管合并；C5：第48-61管合并；C6：第62-72管合并；C7：第73-89管合并；

   （8）、取硅胶200-300目，按照步骤6的过程活化后湿法装柱，柱子尺寸：20×400mm，装柱高度：280mm；

   （9）、取步骤7分离所得的级分C2，用甲醇溶解，用三倍其质量的60~100目硅胶拌样，干法上样，以氯仿：甲醇：水=9：2：0.1进行梯度洗脱，用20mL试管分段收集，每管收集18mL，利用TLC薄层色谱跟踪检测，根据Rf和颜色进行分段，合并Rf和颜色相同的部分，减压浓缩得五种混合物级分C2-1、C2-2、C2-3、C2-4、C2-5；

C2-1：第1-3管合并；C2-2：第4-12管合并；C2-3：第13-21管合并；C2-4：第22-29管合并；C2-5：第30-39管合并；

（10）、取Sephadex LH-20凝胶装柱，柱子规格：15×800mm；装柱高度：700mm，取步骤9分离所得的级分C2-4，用氯仿：甲醇=1:1溶解，上样；

经氯仿：甲醇=1：1洗脱，用10mL试管分段收集，每管收集5mL，利用TLC薄层色谱跟踪检测，根据Rf和颜色进行分段，合并Rf和颜色相同的部分，其中第10-17管为C2-4c，有白色固体析出，用氯仿反复洗涤，得到白色粉末状物质，经检测为三磷酸腺苷。