[发明专利]前原条和中内胚层细胞

权利要求书

1.细胞培养物，包含：

包含少于2％(v/v)血清和100ng/ml活化素A的培养基，

第一体外细胞群，其包含表达选自OCT4、SOX17、CXCR4、FOXA2、SOX7和SOX1的标志物的细胞，其中所述第一体外细胞群选自H7和H9；以及

第二细胞群，其包含第一体外细胞群的后代细胞，其中该后代细胞选自中内胚层细胞和前原条细胞，其中所述中内胚层细胞表达brachyury、FGF4或SNAI1，以及所述前原条细胞表达FGF8或核定位的β-连接素，其中所述第二细胞群包含至少5％的所述后代细胞，

其中通过使用人胚胎获得的人细胞被排除在外，

其中所述中内胚层细胞通过在所述培养基中培养第一体外细胞群12至48小时获得；所述前原条细胞通过在所述培养基中培养第一体外细胞群6至24小时获得，以及

其中所述中内胚层细胞是能分化为中胚层细胞或定形内胚层细胞的专能细胞；所述前原条细胞是能分化为中内胚层细胞的专能细胞。

2.根据权利要求1的细胞培养物，其中，所述第二细胞群包含至少90％的所述后代细胞。

3.根据权利要求1的细胞培养物，其中，所述brachyury、FGF4或SNAI1的表达高于OCT4、SOX17、CXCR4、FOXA2、SOX7或SOX1的表达。

4.根据权利要求1的细胞培养物，其中，所述FGF8或核定位的β-连接素的表达高于brachyury、FGF4、SNAI1、SOX17、FOXA2、SOX7或SOX1的表达。

5.根据权利要求1的细胞培养物，其中，所述第二细胞群不含选自内脏内胚层细胞、体壁内胚层细胞、原始内胚层细胞、定形内胚层细胞、外胚层细胞和中胚层细胞的细胞。

6.一种细胞培养物，其包含：

包含少于2％(v/v)血清和100ng/ml活化素A的培养基，和

选自中内胚层细胞和前原条细胞的细胞，其中所述细胞来源于选自H7和H9的细胞，其中所述中内胚层细胞表达brachyury、FGF4或SNAI1，以及所述前原条细胞表达FGF8或核定位的β-连接素；

其中所述中内胚层细胞通过在所述培养基中培养H7或H9细胞12至48小时获得；以及所述前原条细胞通过在所述培养基中培养H7或H9细胞6至24小时获得，和

其中所述中内胚层细胞是能分化为中胚层细胞或定形内胚层细胞的专能细胞；以及所述前原条细胞是能分化为中内胚层细胞的专能细胞。

7.一种体外细胞群，其包含中内胚层细胞，所述中内胚层细胞是能分化为中胚层细胞或定形内胚层细胞的专能细胞，其中所述中内胚层细胞来源于选自H7和H9的细胞，以及所述中内胚层细胞表达brachyury、FGF4或SNAI1，其中所述中内胚层细胞通过在包含少于2％(v/v)血清和100ng/ml活化素A的培养基中培养H7或H9细胞12至48小时获得。

8.根据权利要求7的体外细胞群，其中，所述体外细胞群包含至少95％的中内胚层细胞。

9.一种体外细胞群，其包含前原条细胞，所述前原条细胞是能分化为中内胚层细胞的专能细胞，其中所述前原条细胞来源于选自H7和H9的细胞，以及所述前原条细胞表达FGF8或核定位的β-连接素，其中所述前原条细胞通过在包含少于2％(v/v)血清和100ng/ml活化素A的培养基中培养养H7或H9细胞6至24小时获得。

10.根据权利要求9的体外细胞群，其中，所述体外细胞群包含至少95％的前原条细胞。