[发明专利]克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇三合一酶联免疫法及专用试剂盒与试剂盒的检测法

权利要求书

1.一种克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇一次性检测的酶联免疫检测方法，其特征在于：在酶标板上预包被上单克隆抗体，待检测样品中的克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺，还有酶标抗原一起竞争结合包被的单克隆抗体后，用显色剂显色，待检测样品中的克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇含量与待检测样品的百分吸光度值呈反比，与标准曲线比较即可得出待检测样品中克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺含量，所述标准曲线是以克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇标准品浓度百分吸光度值为纵坐标，以克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇标准品浓度的对数值为横坐标绘制而成，所述预包被的单克隆抗体能同时对克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇发生交叉反应，所述百分吸光度值按下式计算：

其中B是标准溶液或样本溶液的平均吸光度值；B0是第一个标准溶液的平均吸光度值。

2.根据权利要求1所述的克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇一次性检测的酶联免疫检测方法，其特征在于：所述待检测样品为待检猪尿、猪肝和/或血液血清的待检测样品，猪尿待检测样品若是清亮尿样，就直接测定，如尿样浑浊须过滤或离心直至清亮，暂不使用尿样待检测样品应冷冻保存，避免反复冻融采取，

所述酶标抗原是通过辣根过氧化物酶HRP标记克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺而得到，

所述血液血清待检测样品处理方法为：取血清，加入酶标记物稀释液稀释，震荡混合均匀即可。

3.一种专用于权利要求1所述检测方法的克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇三合一的酶联免疫检测试剂盒，其特征在于所述试剂盒包括：

1)权利要求1所述的预包被上单克隆抗体的酶标板；

2)权利要求1所述的克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇三合一标准品溶液；

3)浓缩酶标记物；

4)酶标记物稀释液；

5)显色液；

6)浓缩洗液；

7)终止液；

所述酶标记物是在低pH条件下直接氧化辣根过氧化物酶HRP，辣根过氧化物酶HRP经NaIO₄氧化后形成的醛化酶与克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺三种物质的抗原分子的氨基相连，形成斯夫氏碱，进一步用NaBH₄还原生成的稳定物质。

4.根据权利要求3所述的克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇三合一的酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述预包被的单克隆抗体由合成好的完全抗原免疫小鼠，经骨髓细胞融合，培养，筛选出分泌抗体的杂交细胞株，杂交细胞株进行克隆化得到。

5.根据权利要求4所述的克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇三合一的酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述检测试剂盒的克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇交叉反应率分别为：100％、80％、80％，所述检测试剂盒检测尿液和血清的回收率都为60～140％。

6.根据权利要求4所述的克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇三合一的酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述检测试剂盒检测尿液和血清的灵敏度分别为0.1ppb、0.3ppb。

7.根据权利要求4所述的克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇三合一的酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述检测试剂盒标准品的最低检测下限为0.1ppb，最高检测上限为2ppb，超出此浓度的待检测样品需经适量稀释后再进行检测。