[发明专利]一株分泌抗2型猪链球菌的型特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其制备方法无效
| 申请号： | 201210023353.4 | 申请日： | 2012-02-02 |
| 公开（公告）号： | CN102533667A | 公开（公告）日： | 2012-07-04 |
| 发明（设计）人： | 潘秀珍;唐家琪;王长军;李先富;王忠灿 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军南京军区军事医学研究所 |
| 主分类号： | C12N5/20 | 分类号： | C12N5/20;C07K16/12;C12R1/91 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人： | 夏平 |
| 地址： | 210002 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 分泌 链球菌 特异性 单克隆抗体 杂交瘤 细胞株 及其 制备 方法 | ||
1.一株分泌抗2型猪链球菌株的型特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株2A9，其特征在于该杂交瘤细胞株通过如下方法制备：
(1)采用灭活的2型猪链球菌菌株O5ZYH33多次免疫雌性BALB/c小鼠，使小鼠体内抗体达到最高峰时分离脾脏B淋巴细胞；
(2)将步骤(1)分离的脾脏B淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合；
(3)以甲醛灭活的O5ZYH33全菌抗原包被ELISA板，使用全菌ELISA筛选阳性克隆；再进一步以全菌裂解液为抗原用Western blot法再次验证ELISA筛选得到的阳性克隆，最终获得杂交瘤细胞株2A9。
2.根据权利要求1所述的分泌抗2型猪链球菌的型特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株2A9，其特征在于：(1)选用雌性BALB/c小鼠，采用甲醛灭活的O5ZYH33分离株为免疫原，注射菌量为107cfu/只鼠，间隔2周追加免疫共3次，在融合前3天加强免疫一次，菌量为108cfu/只鼠。
3.一种制备分泌抗2型猪链球菌的型特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株的方法，其特征在于包含如下步骤：
(1)采用灭活的2型猪链球菌菌株O5ZYH33多次免疫雌性BALB/c小鼠，使小鼠体内抗体达到最高峰时分离脾脏B淋巴细胞；
(2)将步骤(1)分离的脾脏B淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合；
(3)以甲醛灭活的O5ZYH33全菌抗原包被ELISA板，使用全菌ELISA筛选阳性克隆；再进一步以全菌裂解液为抗原用Western blot法再次验证ELISA筛选得到的阳性克隆，最终获得分泌抗2型猪链球菌的型特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
4.根据权利要求3所述的制备分泌抗2型猪链球菌的型特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株的方法，其特征在于：(1)选用雌性BALB/c小鼠，采用甲醛灭活的O5ZYH33分离株为免疫原，注射菌量为107cfu/只鼠，间隔2周追加免疫共3次，在融合前3天加强免疫一次，菌量为108cfu/只鼠。
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