[发明专利]囊素样多肽衍生物作为复方猪瘟疫苗免疫增强剂的应用

说明书

技术领域

本发明涉及动物疫苗的制备领域，特别涉及囊素样多肽衍生物在制备复方猪瘟疫苗中作为疫苗免疫增强剂的应用。

背景技术

1986年Audhya报道从鸡法氏囊中提取了天然三肽，其氨基酸组成是Lys-His-Gly-NH₂，该三肽能诱导禽类和哺乳类动物的前体B细胞的分化，使B细胞选择性分化激素，可增加人的Daudi B细胞系中cAMP、cGMP的浓度，同时证实人工合成的三肽也有相同的作用。但是，该三肽不能导致前体T细胞的分化。国内外研究业已证实，该三肽能提高体液免疫反应，加强细胞免疫水平，而且对禽流感、猪链球菌等数十种畜禽弱毒疫苗、灭活疫苗和亚单位疫苗具有显著的刺激抗体分泌作用。

    然而，天然三肽与其它天然分离得到的多肽生物活性物质一样，在药物开发应用方面有一定的限制。首先，构象不稳定性：天然线型肽在体外具有很好的生物活性，但是线型肽的分子柔曲造成构象易变，使其与受体结合的强度及选择性受到影响；其次，生物利用度低：较差的膜通透性、易被酶类降解、易清除、在某些情况下难溶解及易聚集的这些特性，致使多肽在消化和循环系统中难以以稳定的药理活性形式存在。有研究表明，天然三肽在体内的半衰期仅为20 min。因此，以Lys-His-Gly-NH₂为免疫增强剂制备的疫苗，免疫效果不理想，在应用受到了很大的限制。

发明内容

本发明目的是提供囊素样多肽衍生物作为复方猪瘟疫苗免疫增强剂的应用，所述囊素样多肽能够显著增强复方猪瘟疫苗的免疫效果。

本发明提供一种囊素样多肽衍生物在制备复方猪瘟疫苗中作为疫苗免疫增强剂的应用，所述囊素样多肽衍生物是由多拷贝的基本序列Lys-His-Gly通过肽键串联而成，其羧基端以酰胺形式存在，结构为：    (Lys-His-Gly-)_nNH₂，n=2、4、6、8或10。

所述复方猪瘟疫苗采用如下方法制备：将1.0ml猪瘟病毒培养液、3.75ml质量浓度为5%的脱脂奶粉和0.5～10.0 mg囊素样多肽衍生物混匀，然后冷冻干燥；所述猪瘟病毒培养液的病毒含量为每毫升大于50000个家的兔感染量。 

本发明将5种囊素样多肽衍生物，作为免疫增强剂应用于复方猪瘟疫苗，获得高效的免疫效果。动物实验结果表明，以囊素样多肽衍生物，作为免疫增强剂制备的复方猪瘟疫苗，抗体的转阳率可达80%以上（免疫后28天），显著高于普通常规疫苗（50%-60%）；而且用新设计的囊素样多肽衍生物作增强剂的疫苗（90%以上）也显著优于天然囊素三肽（80%）。另外，动物实验结果也表明，每头猪注射囊素样多肽衍生物溶液1.0-2.0mL，亦能显著增加疫苗的免疫效果，从而提高猪预防病毒感染和抗病的能力。

具体实施方式

下面结合实施例进一步阐述本发明。

实施例中采用国际通用的化学分子式，各分子式代表的化学名称如下所示：

BOC：叔丁氧羰基；

Cys：半胱氨酸；

DCM：二氯甲烷；

DMF：N,N-二甲基甲酰胺；

DIEA：N,N-二异丙基乙胺；

EDT：乙二硫醇；

FMOC：9-芴甲氧羰基；

Gly：甘氨酸；

His：组氨酸；

HOBt：1-羟基-苯并-三氮唑；

Lys：赖氨酸；

Phenol：苯酚；

Rink-Amide MBHA Resin：2-氯胺苯醇氯化琥珀胆碱树脂；

TBTU：1-氧-3-双二甲胺羰基苯肼三氮唑四氟化硼盐；

TFA：三氟乙酸；

Thioanisole：苯甲硫醚；

TIS：三异丙基硅。

 

实施例1   制备囊素样多肽衍生物（固相化学合成法）

5种囊素样多肽衍生物，下面分别命名为：多肽A、多肽B、多肽C、多肽D、多肽E。其具体组成如下：

多肽A的序列为：Lys-His-Gly-Lys-His-Gly-NH₂。

多肽B的序列为：Lys-His-Gly-Lys-His-Gly-Lys-His-Gly-Lys-His-Gly-NH₂。

多肽C的序列为：