[发明专利]免疫胶体金试纸及其配合光电传感器定量检测CLB的方法

权利要求书

1.一种免疫胶体金试纸条，包括玻璃纤维、胶体金保护垫、支撑板、NC膜和吸水纸，其特征在于，所述吸水纸、NC膜、胶体金保护垫、玻璃纤维设置在所述支撑板上并依次相互部分重叠；所述支撑板上设有两个圆孔，所述NC膜上与所述支撑板上的两个圆孔相对应的圆形区域包被有CLB-BSA的T区条带和包被有羊抗鼠二抗的C区条带，所述胶体金保护垫含有胶体金标记的抗盐酸克伦特罗的抗体。

2.根据权利要求1所述的免疫胶体金试纸条，其特征在于，所述支撑板为PVC板，所述圆孔为1cm。

3.根据权利要求2所述的免疫胶体金试纸条，其特征在于，所述胶体金保护垫含有的抗盐酸克伦特罗抗体的体积为4～20μL。

4.根据权利要求3所述的免疫胶体金试纸条，其特征在于，所述胶体金保护垫的制备方法如下：

a、制备胶体金溶液；

b、将4～20μL的抗盐酸克伦特罗的抗体加入1mL的Tris-HCl缓冲液中，混合搅拌过程中加入10ml胶体金溶液，搅拌10～60min后，用碳酸钾调pH大于8.5，而后加入100～200μL BSA，静置、离心，弃上清液，用洗涤液洗涤，再离心一次，弃上清液，收集红色沉淀，将其均匀的滴加到保护垫上，即得。

5.根据权利要求4所述的免疫胶体金试纸条，其特征在于，所述步骤a具体为：在100～300mL蒸馏水中，加入1％的氯金酸100～500μL，加热到沸腾时，再加入1％的柠檬酸三钠100～500μL，继续加热到溶液呈紫红色后低温维持3～10min，即得。

6.根据权利要求4或5所述的免疫胶体金试纸条，其特征在于，所述步骤b中洗涤剂由聚乙二醇2000 10～100μL、碳酸钾100～300μL、聚乙烯二醇10～100μL和Tris-HCl缓冲液10～30ml配制而成。

7.根据权利要求2所述的免疫胶体金试纸条，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上包被的CLB-BSA和羊抗鼠二抗的体积为2～20μL。

8.根据权利要求7所述的免疫胶体金试纸条，其特征在于，所述硝酸纤维素膜的制备方法如下：

a、制备CLB-BSA；

b、在所述硝酸纤维素膜上与支撑板上两圆孔相对应的圆形区域均匀的滴加2～20μL的羊抗鼠二抗和CLB-BSA，用封阻剂封闭20～60min，蒸馏水冲洗，取出自然晾干，即得。

9.根据权利要求8所述的免疫胶体金试纸条，其特征在于，所述CLB-BSA制备方法如下：取CLB10mg，加入2mL预冷的0.2mol/L盐酸至全部溶解，冷却至零度，30min后，加入120mg NaNO₂溶液，然后将上述溶液加入4mL 0.1mol/L的碳酸盐缓冲液中，混匀后在零度静止1h，以SephadexG50凝胶纯化，用pH7.4的0.05mol/L的Tris-HCl缓冲液洗脱，-20℃保存备用；所述碳酸盐缓冲液中含有40mg的BSA。

10.根据权利要求8或9所述的免疫胶体金试纸条，其特征在于，所述封阻剂由1～10％脱脂奶粉2～10g/L和0.1～0.5g/L的甘氨酸配制而成。

11.一种用如权利要求1所述的免疫胶体金试纸条和光电传感器定量检测CLB的方法，其特征在于，包括如下步骤：

a、经测试后的免疫胶体金试纸条，放在光电传感器的测试区内检测；

b、光电型传感器将检测区域反射的光转换成电信号，根据电信号的强度，计算出CLB的浓度。

12.根据权利要求11所述免疫胶体金试纸条和光电传感器定量检测CLB的方法，其特征在于，步骤a中所述测试后的免疫胶体金试纸条剪切成3cm×0.9cm大小的条子后再进行检测。