[发明专利]薇甘菊萎蔫病毒基因诊断试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种薇甘菊萎蔫病毒基因诊断试剂盒，其特征在于包含两对特异性引物，分别是：

MMWV RNA1 F：5’-TGAGGAATTGGGAAGGTC；

MMWV RNA1 R：5’-CGACTCGGCGTCATAAAC；

MMWV RNA2 F：5’-GGAATCCCTGAAACTATGC；

MMWV RNA2 R：5’-TGCTCCACCAATCACAACA。

2.根据权利要求1所述的薇甘菊萎蔫病毒基因诊断试剂盒，其特征在于：所述的薇甘菊萎蔫病毒基因诊断试剂盒还包括dNTP混合物、含mg²⁺的10倍反应缓冲液和聚合酶。

3.根据权利要求2所述的薇甘菊萎蔫病毒基因诊断试剂盒，其特征在于：所述的聚合酶为TaqE。

4.一种应用权利要求1-3任一项所述的试剂盒检测薇甘菊萎蔫病毒的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)提取待测植物样品的RNA；

(2)往步骤(1)得到的RNA中分别加入引物MMWV RNA1 F和MMWVRNA1 R，引物MMWV RNA2 F和MMWV RNA2 R，PCR扩增后分别得到MMWV RNA1 cDNA和MMWV RNA2 cDNA；

(3)往MMWV RNA1 cDNA中加入引物MMWV RNA1F和MMWV RNA1R，进行PCR扩增得到扩增产物1；往MMWV RNA2 cDNA中加入引物MMWVRNA2 F和MMWV RNA2 R，进行PCR扩增得到扩增产物2；将两种扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，若扩增产物1在329bp出现明亮的条带，同时扩增产物2在364bp出现明亮的条带，则MMWV为阳性，说明待测植物样品中携带薇甘菊萎蔫病毒；否则MMWV为阴性，表明待测植物样品没有携带薇甘菊萎蔫病毒。