[发明专利]一种用于防治棉铃疫病的萎缩芽孢杆菌及其微生物菌剂

说明书

技术领域

本发明属于农业微生物领域，具体涉及一种用于防治棉铃疫病的萎缩芽孢杆菌和含有该萎缩芽孢杆菌的微生物菌剂，以及它们在防治棉铃疫病上的应用。 

背景技术

棉铃疫病是一种严重的棉花病害，由苎麻疫霉(Phytophthora boehmeriae sawada)引起，它不仅直接为害棉铃，而且为其它病原菌提供了侵染条件。防治棉铃疫病的方法主要是推株并垄、早摘烂铃等栽培措施和化学药剂防治。目前，我国种植棉花的经济效益较低，而且人工费较高，农民不愿投入太多精力来推株并拢；早摘烂铃只能保住部分产量，不足以防控棉铃疫病；化学药剂虽然防治效果较好，但存在容易产生抗药性，化学药剂价格较贵，增加生产成本，以及环境污染等问题。因此，亟需寻找一种省时省力、高效并且成本低廉的防治方法。 

利用有益微生物对植物病害进行生物防治，因具有针对性强、防效高且环保等优点越来越受到重视。特别是在蔬菜气传病害和作物土传病害上应用较多。有关棉铃疫病的生物防治方面研究很少。马平等(马平等.生物防治通报.1993.9(3))发现木霉菌和腐霉菌对棉铃疫病具有一定防治效果，并筛选到生防细菌MB-3和MB-7，其发酵液10倍稀释液对棉铃疫病田间防治效果分别为34.9％和45.4％(马平等.中国生物防治.1998.14(2))。 

芽孢杆菌(Bacillus)具有分布广、易分离培养、能产生抗逆性较强的芽孢、贮藏期长和使用方便等优点，是一种理想的生防微生物，相比其他类型的生防因子，更有利于菌剂的生产，剂型加工，在环境中存活、定殖与繁殖。因此，筛选对病原菌具有抑制作用的芽孢杆菌是防治有关植物病害的最有效方法之一。 

发明内容

本发明目的在于提供一种用于防治棉铃疫病的萎缩芽孢杆菌菌株，该菌株具有高效、广谱杀菌活性等优点。 

本发明第二目的在于提供一种微生物菌剂。 

本发明第三目的在于提供上述微生物菌剂的制备方法。 

本发明第四目的在于提供上述萎缩芽孢杆菌菌株在防治棉铃疫病上的用途。 

本发明第五目的在于提供上述微生物菌剂在防治棉铃疫病上的用途。 

本发明通过以下技术方案实现： 

一种萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)菌株HMB22922，己于2011年12月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所)，保藏编号为CGMCC No.5614。 

一种微生物菌剂，其活性成分为萎缩芽孢杆菌HMB22922菌体和它的胞外代谢产物。 

上述微生物菌剂可以为液体制剂。 

上述微生物菌剂的制备方法，包括如下步骤：菌种活化，种子液制备和发酵培养。 

上述微生物菌剂的制备方法，具体包括如下步骤： 

(1)菌种活化：将低温保存的HMB22922菌株在LB平板培养基上活化，挑取单菌落在LB斜面培养基上30℃培养24～36小时，得活化的菌株； 

(2)种子液制备：用无菌的接种环刮取一环步骤(1)活化的菌株接种到100mLLB液体培养基中，在26～34℃、摇床转速为170～210rpm条件下培养22～25小时，得种子液； 

(3)发酵培养：按照体积比为0.5％～3.0％的比例将步骤(2)的种子液接入到蔗糖豆饼粉培养基(pH值为5.8～6.2)中，在温度为28～34℃、摇床转速为170～210rpm的条件下发酵培养36～54h，得发酵液；所述的蔗糖豆饼粉培养基，其组成成分及其重量百分比为：蔗糖2.0～3.0％，豆饼粉1.6～2.4％，NaCl 0.1～0.2％，CaCO₃ 0.1～0.3％，KH₂PO₄ 0.01～0.03％和MgSO₄·7H₂O 0.01～0.03％，其余为水； 

(4)检测发酵液中菌体和芽孢数量，待发酵液中成熟芽孢占到芽孢和菌体总数的90％时停止发酵培养；所得即为HMB22922菌株的液体制剂。 

上述制备方法步骤(2)和(3)中所述的温度优选为30～32℃；所述的摇床转速优选为210rpm；所述的培养时间优选为48h。 

所述的LB平板培养基、LB斜面培养基和LB液体培养基等按照常规方法制备。