[发明专利]用于防治黄瓜霜霉病的摩加夫芽孢杆菌及其微生物菌剂

说明书

技术领域

本发明属于农业微生物领域，具体涉及一种用于防治黄瓜霜霉病的摩加夫芽孢杆菌和含有该摩加夫芽孢杆菌的微生物菌剂，以及它们在防治黄瓜霜霉病上的用途。

背景技术

黄瓜霜霉病是由古巴假霜霉菌(Pseudoperonospora cubensis Rostow)引起的侵染性气传病害，给黄瓜生产带来巨大威胁。防治黄瓜霜霉病的方法主要有抗病育种、化学防治和生态防治(如高温闷棚等)等。由于黄瓜霜霉病为多基因控制的数量性状遗传，抗病育种难以进行且抗性容易丧失；化学防治存在容易产生抗药性和对人、环境污染的问题；而生态防治的高温闷棚需要黄瓜苗龄、长势和天气情况都合适的条件下才能进行，应用受条件限制。近年来，生物防治方法由于具有对人、畜安全，对环境没有污染，且对防治对象的针对性强，效果好、成本低等优点，已成为防治黄瓜霜霉病的重要途径。

生物防治黄瓜霜霉病的方法包括利用植物提取物、植物的抗病性诱导和生防菌防治等。已报道的用于防治黄瓜霜霉病的植物提取物近10余种，但是植物提取物的提取过程繁琐、生产成本高，人工合成单一物质使用后病原菌容易产生抗药性缺点，使该方法难以应用。利用生防菌防治黄瓜霜霉病已报道有枯草芽孢杆菌ZH-8液体制剂(张淑梅等.生物技术.2004(4))和非致病性镰刀菌FO47和FO47B10(杨猛等.西北农林科技大学学报(自然科学版)；2005年05期)。

芽孢杆菌(Bacillus)具有分布广、易分离培养、能产生抗逆性较强的芽孢、贮藏期长和使用方便等特点，是一种理想的生防微生物，相比其他类型的生防因子，更有利于菌剂的生产，剂型加工，在环境中存活、定殖与繁殖。因此，筛选对病原菌具有抑制作用的芽孢杆菌是防治有关植物病害的最有效方法之一。

发明内容

本发明目的在于提供一种用于防治黄瓜霜霉病的摩加夫芽孢杆菌菌株，该菌株具有高效、广谱杀菌活性等优点。

本发明第二目的在于提供一种微生物菌剂。

本发明第三目的在于提供上述微生物菌剂的制备方法。

本发明第四目的在于提供上述摩加夫芽孢杆菌菌株在防治黄瓜霜霉病上的用途。

本发明第五目的在于提供上述微生物菌剂在防治黄瓜霜霉病上的用途。

本发明通过以下技术方案实现：

一种摩加夫芽孢杆菌(Bacillus mojavensis)菌株HMB20199，已于2011年12月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.5617。

利用上述摩加夫芽孢杆菌HMB20199生产的微生物菌剂，其活性成分为摩加夫芽孢杆菌HMB20199菌体和它的胞外代谢产物。

上述微生物菌剂可以为液体制剂。

上述微生物菌剂的制备方法，包括如下步骤：菌种活化，种子液制备和发酵培养。

上述微生物菌剂的制备方法，具体包括如下步骤：

(1)菌种活化：将低温保存的HMB20199菌株在LB平板培养基上活化，挑取单菌落在LB斜面培养基上30℃培养24～36小时，得活化的菌株；

(2)种子液制备：用无菌的接种环刮取一环步骤(1)活化的菌株接种到100mLLB液体培养基中，在26～34℃、、摇床转速为170～210rpm的条件下培养22～25小时，得种子液；

(3)发酵培养：按照体积比为0.5％～3.0％的比例将步骤(2)的种子液接入到蔗糖豆饼粉培养基(pH值为5.8～6.2)中，在温度为28～34℃、摇床转速为170～210rpm的条件下发酵培养36～54h，得发酵液；所述的蔗糖豆饼粉培养基，其组成成分及其重量百分比为：蔗糖2.0～3.0％，豆饼粉1.6～2.4％，NaCl 0.1～0.2％，CaCO₃ 0.1～0.3％，KH₂PO₄ 0.01～0.03％和MgSO₄·7H₂O 0.01～0.03％，其余为水；

(4)检测发酵液中菌体和芽孢数量，待发酵液中成熟芽孢占到芽孢和菌体总数的90％时，停止发酵培养；所得即为HMB20199菌株的液体制剂。

上述制备方法步骤(2)和(3)中所述的温度优选为30～32℃；所述的摇床转速优选为210rpm；所述的培养时间优选为48h。

所述的LB平板培养基、LB斜面培养基和LB液体培养基均按照常规方法制备。