[发明专利]沙蚕蛋白酶在制备治疗白血病药物中的用途

说明书

技术领域

本发明为沙蚕蛋白酶在制备治疗白血病药物中的用途，涉及沙蚕蛋白酶作为注射剂在抗血液系统肿瘤白血病中的应用，属于医药技术领域。

背景技术

白血病Leukemia是由于造血系统中某一系列细胞的异常肿瘤性增生，并在骨髓、肝、脾、淋巴结等脏器广泛浸润，外周血中白细胞有质和量的异常，白血病是骨髓恶性克隆性疾病。患者红细胞和血小板数量减少，从而导致贫血、出血、感染、浸润等临床表现。白血病死亡率高、危害大。

白血病的治疗方法有化学药物疗法、骨髓移植和一般支持疗法。白血病并没有特异有效的化疗药物，和一般抗肿瘤药物一样，可分为影响核酸生物合成的药物，如巯基嘌呤、阿糖胞苷、环胞苷、羟基脲；影响DNA结构和功能的药物，如环磷酰胺、马利兰；破坏DNA的抗生素，如丝裂霉素、博来霉素；干扰转录和阻止RNA合成的药物，放线菌素D、阿霉素、柔红霉素；抑制蛋白质生物合成药物，如抑制微管蛋白合成的长春碱类，紫杉醇类；干扰核蛋白体功能药物，三尖杉生物碱类；影响氨基酸供应的药物，如L-门冬酰胺酶；引起细胞凋亡或诱导分化的药物，如砷制剂、全反维甲酸，治疗急性粒细胞白血病有较好的疗效。

上述这些抗肿瘤抗白血病药物，大都是小分子物质，可以进入全身各个器官组织细胞，不仅抑制或杀死肿瘤细胞同时也严重影响了正常组织代谢、细胞活动，尤其是代谢旺盛的组织，如骨髓、毛囊、消化道。这些药物共性的毒副作用分为近期毒性和远期毒性作用。近期毒性，包括骨髓抑制：造成白细胞、血小板、红细胞大量降低，消化道反应：严重恶心呕吐、口腔食道炎症溃疡，脱发，肝脏、心脏、肾脏膀胱等器官损害以及神经毒性等。远期毒性，包括第二原发性肿瘤，不育畸形等。因此，抗白血病治疗药物特别需要有一种能对白血病肿瘤细胞有较强的杀伤作用，而对正常白细胞、红细胞不影响或影响较轻、在血液循环系统起作用、而不渗透到并影响其他脏器的药物。

沙蚕蛋白酶是提取自沙蚕的一类蛋白酶，包括：N-V蛋白酶（Swiss prot 数据库中登录号Accession Number P83433）、P86330蛋白酶（UniProt Knowledgebase 数据库中登录号Accession Number）和双齿围沙蚕纤溶酶。

发明内容

本发明公开了沙蚕蛋白酶在制备治疗白血病药物中的用途，公开了沙蚕蛋白酶的新用途。

本发明涉及的沙蚕蛋白酶是等电点pI为酸性的丝氨酸蛋白酶，包括日本刺沙蚕纤溶酶（UniProt Knowledgebase 数据库登录号Accession Number P86330）、N-V蛋白酶（Swiss prot 数据库登录号Accession Number P83433）和双齿围沙蚕纤溶酶。

本发明沙蚕蛋白酶抗白血病的应用，包括：用沙蚕蛋白酶或含有沙蚕蛋白酶组分的复方制剂治疗白血病。

采用沙蚕蛋白酶的注射剂，在体外抗白血病细胞实验中有显著的杀伤白血病肿瘤细胞的作用，临床采用注射剂静脉给药，治疗各种白血病。

通过对以下肿瘤株进行实验：慢性粒细胞白血病细胞株 K562、急性粒细胞白血病细胞株 NB4、急性T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat，研究表明沙蚕蛋白酶抗白血病细胞药效作用非常显著。

实验例1、日本刺沙蚕纤溶酶对NB4白血病细胞的杀伤作用

1、实验方法

1.1细胞培养

将人急性粒细胞白血病细胞株NB4细胞加在RPMI1640培养液中，悬浮生长，RPMI1640培养液成分：含10%胎牛血清、0.2%羟乙基哌嗪乙硫磺酸(HEPES)、0.2% NaHCO₃、青霉素(100 U.ml^-1)及链霉素(100μg.ml^-1 )；37℃ 5% CO2 孵箱中培养传代，两天传代一次，每次传代均以1500转离心5分钟，收集细胞，更换新鲜培养液。

1.2. 台盼蓝计数

细胞以70000个/ml接种于培养瓶中，分为给日本刺沙蚕纤溶酶 1、2、4、8、16μg/ml组及对照组。加药后分别在24、48、72h取各组细胞，台盼蓝染色后，在光镜下记活细胞数，整个实验重复三次，取平均值。并以时间为横坐标，平均活细胞数为纵坐标绘制生长曲线；

1.3. 噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞的增殖抑制率