[发明专利]表达O型口蹄疫病毒空衣壳的重组缺损腺病毒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及重组腺病毒，尤其涉及表达O型口蹄疫病毒空衣壳的重组缺损型腺病毒及其构建方法，本发明进一步涉及该重组缺损腺病毒在制备预防或治疗口蹄疫疫苗中的应用，属于口蹄疫的防治领域。

背景技术

口蹄疫是猪、牛、羊等主要家畜和其它家养、野生偶蹄动物共患的一种急性、热性、高度接触性传染病，易感动物达70多种。口蹄疫的临床特征是在口腔黏膜、蹄部和乳房皮肤发生水泡。该病传播途径多、速度快，曾多次在世界范围内暴发流行，造成巨大经济损失。鉴于此，世界动物卫生组织(OIE)将其列为A类传染病之首。目前，有三分之二的OIE成员国流行FMD，时刻威胁着无FMD国家和地区的家畜安全和畜产品贸易。口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus，FMDV)属于微核糖核酸病毒科口蹄疫病毒属，其直径为23纳米。目前已知口蹄疫病毒在全世界有七个血清型C、A、O、C、南非1、南非2、南非3和亚洲1型，以及65个以上亚型。O型口蹄疫为全世界流行最广的一个血清型，中国流行的口蹄疫主要为O、A、C三个血清型及ZB型(云南保山型)。口蹄疫病毒各血清之间没有交叉保护，即使是同一血清型内的不同亚型之间抗原差异程度也较大，以至于一种亚型的疫苗可能不完全保护同一血清型中其它亚型FMDV的感染，给口蹄疫的防治带来了极大的困难。疫苗接种是成功预防、控制乃至最终消灭口蹄疫的最有效手段。目前用于防治口蹄疫的疫苗主要有合成肽疫苗和灭活疫苗两种。

合成肽疫苗是基于病毒的主要抗原位点，利用病毒的主要抗原位点的一部分氨基酸序列合成的具有一定结构的多肽，用于免疫动物诱导中和抗体而达到保护的目的。但是，如果在病毒的主要抗原位点上发生关键氨基酸的突变，就会导致合成肽疫苗免疫保护效力的丧失。

口蹄疫灭活疫苗在消灭欧洲的口蹄疫以及控制世界其他国家的口蹄疫过程中发挥了重要作用。但是，灭活疫苗的生产中需要密闭设施来繁殖活病毒，存在活病毒逃逸的潜在风险，世界上一些地区FMD的暴发似乎与灭活疫苗中残存的活病毒有关。此外，制备FMD灭活疫苗的抗原未经提纯，含有病毒非结构蛋白，难于进行感染动物和免疫动物的鉴别诊断。鉴于FMD灭活疫苗的上述缺点，国内外研究者都在寻求一种更加安全有效的口蹄疫疫苗。理想的口蹄疫疫苗具有病毒的完整抗原谱，其免疫原性类似与天然的病毒颗粒，并且没有病毒的核酸，不能自主复制等特点。如今成为研究热点的口蹄疫候选疫苗包括蛋白质亚单位疫苗、合成肽疫苗、DNA疫苗和重组病毒等。到目前为止，证明最有效的FMD新型疫苗是人5型复制缺损型腺病毒(Ad5)表达的口蹄疫病毒空衣壳。Ad5作为一个理想的载体的重要原因是因为其免疫动物后不产生针对Ad5的中和抗体，排除了二次免疫的干扰。研制出安全、高效、免疫保护期更长的以腺病毒为载体的口蹄疫病毒空衣壳疫苗，对于口蹄疫的有效预防将具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的之一是提供编码O型口蹄疫病毒空衣壳的亚基因组P1-2A-3C以及该亚基因组P1-2A-3C的突变体；

本发明的目的之二是提供携带亚基因组P1-2A-3C或该亚基因组P1-2A-3C的突变体并能够稳定表达O型口蹄疫病毒空衣壳的重组缺损型腺病毒；

本发明的目的之三是提供一种构建上述重组缺损型腺病毒的方法；

本发明目的之四是将所构建的重组缺损型腺病毒应用于制备成预防或治疗口蹄疫病毒空衣壳疫苗或试剂。

为了实现上述目的，本发明首先提供了编码O型口蹄疫病毒空衣壳的亚基因组P1-2A-3C，其核苷酸序列为SEQ ID No.1所示。此外，本发明还提供了该亚基因组P1-2A-3C的突变体，其核苷酸序列为SEQ ID No.2所示。