[发明专利]用于预防和/或治疗呼吸道合胞病毒感染的疫苗

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于预防和/或治疗呼吸道合胞病毒感染所致疾病的共免疫疫苗，特别涉及一种由DNA疫苗和亚单位疫苗共同组成的用于预防和/或治疗呼吸道合胞病毒感染所致疾病的共免疫疫苗。

背景技术

呼吸道合胞病毒(RSV)属于副粘病毒科肺病毒属成员，为非节段性单股负链RNA病毒，分为A和B两个亚型。RSV病毒大小约120-300纳米，有包膜，由15222个核苷酸组成，编码10种主要蛋白，分别由三个跨膜蛋白(G、F和SH)、两个基质蛋白(M和M 2)、三个核衣壳蛋白(N、P和L)及两个非结构蛋白(NS1和NS2)构成。RSV是全世界范围内引起婴幼儿、免疫缺陷病人和老年人呼吸道感染、毛细支气管肺炎等急性下呼吸道感染的重要病原。美国1979～1997年的统计，每年因RSV感染导致下呼吸道疾病而住院和死亡的婴儿数分别为12.5万和450人，其中死亡率为2％。在我国，不但有RSV散发性感染，还发生过数次大规模爆性流行，2000～2002年间北京1402份婴幼儿患者中，有66.1％的病毒性呼吸道感染是由该病毒引起的。1985～1992年期间先后在我国广州、山西、北京、以及河北和天津等地形成了4次大流行。我国RSV流行主要以A亚型为主，但有的年份B亚型也可为主要优势株。因此，研制安全、有效的呼吸道合胞病毒疫苗是生命科学重大而急迫的问题。2001年世界卫生组织(WHO)已将开发安全有效的呼吸道合胞病毒疫苗列为21世纪需要优先解决的问题之一。

RSV疫苗的研制已有40多年的历史，但是至今仍然没有有效的、被批准使用的疫苗。目前研究的RSV疫苗主要包括灭活疫苗、减毒疫苗、亚单位疫苗和核酸疫苗几大类。20世纪60年代研制的福尔马林灭活疫苗(FI-RSV)，不仅不能预防RSV感染，反而再感染后使病情加重，甚至有的引起死亡，死者的肺组织内有T细胞浸润。通过对小鼠的研究已经确认FI-RSV诱生的T细胞亚群Th2-类细胞因子是加重病情的原因。随着FI-RSV疫苗研制的失败，人们开始通过人工诱变的方法构建减毒的RSV疫苗。从20世纪70年代至今，人工诱变RSV减毒株仍然没有应用于预防RSV的感染。人工诱变获得的减毒株存在较多的缺陷，并以遗传不稳定性为其主要缺点。亚单位疫苗和重组DNA疫苗是近年RSV疫苗研究的热点，主要以病毒表面糖蛋白F和G作为靶抗原。亚单位疫苗是将病毒抗原基因在大肠杆菌或酵母表达系统中进行蛋白质表达，提纯纯化后制成的。亚单位疫苗能够诱导较高水平的中和性抗体和保护抗体，降低RSV的感染率，但是由病毒引起的下呼吸道疾病的发病率没有明显的降低，这主要是由大量Th2型辅助性T细胞浸润肺部造成的。DNA疫苗又称核酸疫苗，它是将含有编码特定抗原蛋白质的基因序列克隆到合适的质粒载体上，制备成核酸表达载体，通过肌肉注射等方法将其导入机体内，通过宿主细胞的转录系统合成抗原蛋白，从而激发机体免疫系统产生针对外源蛋白质的特异性免疫应答反应。虽然DNA疫苗可以同时激发机体产生基于免疫球蛋白介导的的体液免疫反应和基于杀伤性T淋巴细胞介导的细胞免疫。但是其诱导的抗体水平，特别是中和抗体水平较低。虽然有研究报道，使用免疫增效剂可以在一定水平上提高DNA疫苗所激发的体液免疫反应，但是提升幅度有限。

因此，对于RSV疫苗的开发工作，特别是开发一种既能诱导较高水平抗体，又能降低疫苗免疫后肺部T淋巴细胞大量浸润的新型疫苗制剂已经成为了迫在眉睫的研究重点。

发明内容

本发明的目的是提供一种预防和/或治疗呼吸道合胞病毒感染所致疾病的共免疫疫苗。所述共免疫疫苗是由两种或两种以上疫苗混合而制成的疫苗。

本发明所提供的预防和/或治疗呼吸道合胞病毒感染所致疾病的共免疫疫苗由DNA疫苗和亚单位疫苗组成；所述DNA疫苗为表达序列表中序列2所示蛋白质的编码基因的重组表达载体；所述亚单位疫苗为序列表中序列2所示蛋白质。

在实际应用中，所述DNA疫苗和所述亚单位疫苗的使用质量配比为如下a)或b)或c)：

a)(1∶5)-(5∶1)；

b)(1∶2)-(2∶1)；

c)1∶1或1∶2或2∶1。

所述重组表达载体中启动所述序列表中序列2所示蛋白质的编码基因转录的启动子是T7启动子，其核酸序列为5’-TAATACGACTCACTATAGG-3’。

在本发明的一个实施例中，所述重组表达载体具体为在proVAX质粒的多克隆位点插入序列表中序列2所示蛋白质的编码基因所得到的重组质粒；所述多克隆位点具体为EcoR I和Xba I。