[发明专利]禽流感病毒H5N1亚型限制性CTL表位多肽及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及禽流感病毒H5N1亚型限制性CTL表位多肽及其应用。

背景技术

流感病毒(Influenza virus)属正粘病毒科，为分节段RNA病毒，最早是在1933年由Wilson Smith发现的。流感病毒的RNA由8个节段组成，共编码11个蛋白：聚合酶蛋白(PB1、PB2、PA)、核蛋白(NP)、血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)、基质蛋白(M1、M2)、非结构蛋白(NS)及两个新发现的蛋白PB1-F2和PB1N40。依据血凝素HA和神经氨酸酶NA抗原性的不同，流感病毒共有16个H亚型(H1-16)和9个N亚型(N1-9)，两者之间的不同组合形成流感病毒的不同亚型。根据核蛋白抗原性的不同，将流感病毒分为甲、乙、丙三型。甲型流感病毒具有高致病性和高变异性的特点，其中高致病性禽流感病毒(highly pathogenic avian influenza，HPAI)H5N1感染鸡后能够在数小时或几天内引起鸡死亡，致死率高达100％，已在世界范围内引起了比较严重的经济损失，被世界动物卫生组织列为A类动物疫病。1997年首次报道HPAI H5N1感染人并导致死亡的病例，共有18人被感染，其中6人死亡。2003年至今，世界范围内已有超过400人感染HPAI H5N1，致死率达到60％。目前，在禽类养殖过程中普遍使用的为禽流感病毒灭活疫苗，通过诱导机体产生针对病毒表面蛋白的抗体发挥免疫保护作用，但高致病性禽流感病毒具有高变异性的特征，灭活疫苗对新型毒株的流行缺乏有效的免疫保护，且新疫苗的研制往往滞后于疾病的流行。

细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T lymphocytes，CTL)介导的特异性细胞免疫应答在机体抗病毒和抑制肿瘤的过程中起着关键作用。病毒感染细胞后，内源性病毒蛋白在被感染细胞内经过一系列酶解过程，降解为8-11个氨基酸的多肽，再与相应的主要组织相容性复合体(Major histocompatibility complex，MHC)I类分子抗原多肽结合槽结合，形成MHC I-抗原肽复合体，并呈递于感染细胞表面。MHC I-抗原肽复合体(pMHCI)被表达于T细胞表面的受体(T cell receptor，TCR)识别并与之结合。TCR与pMHC I复合体之间的相互作用能够诱导CD8+T细胞活化、增殖为CTL，释放穿孔素和颗粒酶，杀伤被病毒感染的靶细胞或肿瘤细胞。研究表明，禽流感病毒感染5-7天时，CTL效应细胞能够迁移至被感染动物的肺部，并有效清除病毒，说明特异性CTL免疫应答在抗禽流感病毒感染过程中起重要作用。

流感病毒内部蛋白(如PB1、PA、NP和M蛋白等)与病毒的复制和转录等相关，在病毒变异过程中相对保守，其上的CTL表位可在不同毒株间产生交叉免疫保护作用。通过对流感病毒CTL表位的鉴定，筛选出相对保守的CTL表位，为多肽疫苗的研究提供重要数据。目前，流感病毒CTL表位研究最多的是人和鼠，已鉴定出9条对鼠具有免疫保护作用的流感病毒CTL表位。迄今为止，尚未报道对鸡具有免疫保护作用的禽流感病毒CTL表位。

MHC I/抗原肽复合体是激活特异性CTL免疫应答的关键因素。鸡MHC基因位于第16号染色体，基因结构简单且致密，只有一个MHC I类分子基因座BF，在BF基因中只有BF2基因显性表达，在抗病毒免疫反应中发挥限制性结合和递呈抗原表位的作用。研究表明，鸡BF2基因与多种禽类病毒病的抗性或易感性有关。以鸡为宿主筛选禽流感病毒CTL表位，则会为禽流感病毒多肽疫苗的研究和抗病品系的筛选提供依据。

发明内容

本发明的目的是提供一种多肽及其应用。

本发明所提供的多肽为禽流感病毒H5N1亚型限制性CTL表位多肽，其名称为P1，氨基酸序列如序列表中序列1所示。

编码所述禽流感病毒H5N1亚型的限制性CTL表位多肽的核酸分子也属于本发明的保护范围。

本发明的核酸分子可以是RNA形式(例如mRNA、hnRNA、tRNA或任意其它形式)，也可以是DNA形式(包括但不限于通过克隆或合成产生，或其任意组合而产生的cDNA和基因组DNA)。DNA可以是三链、双链或单链，或其任意组合。DNA或RNA的至少一条链的任意部分可以是编码链，也称作有义链，或可以是非编码链，也称作反义链。

编码所述禽流感病毒H5N1亚型的限制性CTL表位多肽的核酸分子具体可为序列表中序列2所示的双链DNA分子。