[发明专利]一种猪主动脉真空冻干脱细胞基质及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及组织工程领域，具体地说，是一种猪主动脉真空冻干脱细胞基质及其制备方法和应用。

背景技术

我国每年新生15万的先天性心脏病患儿。而先天性心脏病手术中需要大量血管或生物补片替代物。初步估算仅国内医疗市场其前景每年约为上亿元。而临床常用的人工血管和冷冻保存同种血管无生长性且容易引起狭窄钙化多须再次手术治疗，给患者带来莫大痛苦的同时造成大量医疗资源的浪费。而且常用人工血管或生物补片多为进口，价格极其昂贵。20世纪80年代以来，随着生物医学工程技术的发展，各种代血管移植材料被用于心血管疾病外科治疗中。人们长期以来一直在寻找血管的最佳替代品，包括人工材料、生物材料以及复合材料等，但存在排斥、血栓、内皮细胞增生、破裂、钙化等缺点，其治疗效果仍受到很大限制。故人工代血管移植体仍不能完全取代人同种冷冻保存血管的地位和作用。

中国专利文献CN101327338A公开了一种多孔的保留有生物活性因子的膀胱无细胞基质及制备方法，取猪、兔、狗或牛的膀胱，经消化液，低渗缓冲液、含表面活性剂的高渗缓冲液、含核酸酶的缓冲液和去离子水等处理后，再经冷冻、冻干和灭菌后得到无菌的膀胱无细胞基质。中国专利文献CN101474426A公开了一种脱除血管组织内细胞的血管基质及其制备方法，提供了一种能够脱除血管组织内的细胞成分并最大程度保护脱细胞基质的结构完整性，包括脱细胞、去除去垢剂和进行酶处理。中国专利文献CN2860403Y公开了一种生物型人工血管，由经固定剂交联固定和去抗原处理过的动物血管所形成的基材，以及键合在基材内表面上的含有抗凝血组分的表面层组成。但是关于一种猪主动脉真空冻干脱细胞基质及其制备方法和应用目前还未见报道。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种猪主动脉真空冻干脱细胞基质。

本发明的再一的目的是，提供一种猪主动脉真空冻干脱细胞基质的制备方法。

本发明的另一的目的是，提供一种猪主动脉真空冻干脱细胞基质的应用。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：一种猪主动脉真空冻干脱细胞基质，所述的猪主动脉真空冻干脱细胞基质的制备方法包括以下步骤：（1）冻干预处理：采用预冻速率1K/min，最终温度-42.9℃对猪主动脉血管进行冻干预处理；（2）脱细胞化：冻干血管用0.25%胰蛋白酶PBS溶液作用，然后0.5%Tritox X-100 PBS溶液室温下振荡，PBS溶液振荡冲洗；（3）采用步骤（1）的条件再次真空冻干所述的基质，常温保存。

所述的猪主动脉真空冻干脱细胞基质的制备方法包括以下步骤：（1）冻干预处理：采用预冻速率1K/min，最终温度-42.9℃对猪主动脉血管进行冻干预处理；（2）脱细胞化：冻干血管用含EDTA 0.04%的0.25%胰蛋白酶PBS溶液在37℃，5%CO₂培养箱中作用12小时，然后0.5%Tritox X-100 PBS溶液室温下振荡4小时，PBS溶液振荡冲洗3次，每次30分钟；（3）采用步骤（1）的条件再次真空冻干所述的基质，常温保存。

为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：一种猪主动脉真空冻干脱细胞基质的制备方法，所述的猪主动脉真空冻干脱细胞基质的制备方法如下：（1）冻干预处理：采用预冻速率1K/min，最终温度-42.9℃对猪主动脉血管进行冻干预处理；（2）脱细胞化：冻干血管用0.25%胰蛋白酶PBS溶液作用，然后0.5%Tritox X-100 PBS溶液室温下振荡，PBS溶液振荡冲洗；（3）采用步骤（1）的条件再次真空冻干所述的基质，常温保存。

所述的制备方法包括以下步骤：（1）冻干预处理：采用预冻速率1K/min，最终温度-42.9℃对猪主动脉血管进行冻干预处理；（2）脱细胞化：冻干血管用含EDTA 0.04%的0.25%胰蛋白酶PBS溶液在37℃，5%CO₂培养箱中作用12小时，然后0.5%Tritox X-100 PBS溶液室温下振荡4小时，PBS溶液振荡冲洗3次，每次30分钟；（3）采用步骤（1）的条件再次真空冻干所述的基质，常温保存。

为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是：所述的猪主动脉真空冻干脱细胞基质在制备生物血管中的应用。

本发明优点在于：

1、本发明以猪主动脉作为研究对象，通过优化制备条件，制得具有合适孔隙率、力学性能和免疫原性的冻干脱细胞血管，通过动物在体实验证明立体构建血管临床血管移植的可行性，为进一步应用于临床提供了实验依据；