[发明专利]一种对动物药材中纤溶活性成分定量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及对蚂蚁、土鳖虫等动物药材中纤溶活性成分定量的方法。 

技术背景

纤溶系统是指纤溶酶原经特异性激活物作用转化为纤溶酶，导致体内纤维蛋白不断溶解的反应体系，主要包括纤溶酶原、纤溶酶、纤溶酶原激活物及纤溶酶原激活物抑制剂。 

肝纤维化是肝脏对各种因素所致的慢性损伤的一种修复反应，其特征是细胞外基质（ECM）在肝内过度沉积，而ECM的降解受多种因素的调控，近年有研究显示纤溶酶原激活系统可通过调节基质金属蛋白酶（MMPs）的活性参与ECM的降解过程。 

纤溶酶可以直接降解纤维蛋白原和纤维蛋白，还可以降解多种ECM成分，包括纤维连接蛋白、层连蛋白等。此外，纤溶酶又是基质金属蛋白酶（MMPs）活化所必需的，MMPs是最重要的一类降解ECM的蛋白酶类。 

肝纤维化属中医“癥结痞块”范畴，中医认为肝血瘀阻是基本病机，用药以活血化瘀为主的治疗原则；现代研究显示纤溶酶原激活系统与肝纤维化有直接关系，活血化瘀中药能明显影响机体纤溶系统，有抗凝血和促进纤维蛋白溶解的功效。因此我们选择中药中动物药材提取纯化具有纤溶活性的成分，研究其在抗肝纤维化的药物领域的开发。现代中药一直无法准确提供动物药（如蚂蚁、土鳖虫）的成品制剂中的含量测定方法，因此极大的限制了动物药的使用，本专利首次将体外测定蛋白活性方法引入药物含量测定过程中，为同类型制剂的质量研究、生产控制提供了新的手段。 

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明提供了一种对蚂蚁、土鳖虫等动物药材中纤溶活性成分定量的方法，其方法步骤： 

1、取牛血纤维蛋白原适量，研细，精密称定，用硼砂缓冲液制成每1ml含2mg的溶液，即得； 2、纤维蛋白标准板的制备：取已消毒的培养皿，分别加入纤维蛋白原溶液10ml，快速加入凝血酶溶液（用上述硼砂缓冲液制成每1ml含牛凝血酶40单位）0.5ml，混匀，室温静置10分钟，即成纤维蛋白标准板； 3、对照品溶液的制备：取尿激酶对照品适量，精密称定，用无菌水制成每1ml含8U的溶液，作为对照品溶液；

4、供试品溶液的制备：取本品内容物适量，精密称定，用无菌水制成每1ml含30mg的溶液，振摇20分钟，离心，取上清液作为供试品溶液；

5、测定法：取纤维蛋白板，分别吸取对照品、供试品溶液点于板上，每点10μl，置37℃电热恒温箱中放置18小时，取出，分别测出每个点溶斑的长径和短径，再根据融圈面积计算纤溶活性成分的量。

本发明有益效果：提供了一种新的对蚂蚁、土鳖虫等动物药材中纤溶活性成分定量的方法，工艺简易，效果显著。 

具体实施方式

实施例1：

取牛血纤维蛋白原适量，研细，精密称定，用硼砂缓冲液（取四硼酸钠32.42g和氯化钠5.84g，加蒸馏水500ml，加热溶解，用7mol/L盐酸调节pH值至7.8）制成每1ml含2mg的溶液，即得。     取已消毒的培养皿，加入纤维蛋白原溶液10ml，快速加入凝血酶溶液（用上述硼砂缓冲液制成每1ml含牛凝血酶40单位）0.5ml，混匀，室温静置10分钟，即成纤维蛋白标准板。     取尿激酶对照品适量，精密称定，用无菌水制成每1ml含8U的溶液，作为对照品溶液。

取本品内容物适量，精密称定，用无菌水制成每1ml含30mg的溶液，振摇20分钟，离心，取上清液作为供试品溶液。 

取纤维蛋白板1只，分别吸取对照品、供试品溶液点于板上，每点10μl，置37℃电热恒温箱中放置18小时，取出，分别测出每个点溶斑的长径和短径，再根据融圈面积计算纤溶活性成分的量。 

虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但实施例并不是用来限定本发明，任何熟悉此技艺者，在不脱离本发明之精神和范围内，自当可作各种变化或润饰，同样属于本发明之保护范围。因此本发明的保护范围应当以本申请的权利要求所界定的为准。