[发明专利]一种腺病毒非结构蛋白免疫原、其抗体及应用

说明书

技术领域

本发明涉及腺病毒领域，特别是可用于该病毒所致疾病的诊断领域的新的非结构蛋白免疫原以及相应的抗体和应用。 

背景技术

病毒的结构蛋白具有免疫原性并能激发较强的宿主免疫反应。然而，已有的研究也提示体液免疫和细胞免疫反应也可以由某些病毒的非结构蛋白激发。例如感染丙肝的患者体内具有NS3特异性抗体并可以利用重组NS3蛋白进行检测(参见：Diepolder HM，Zachoval R，Hoffmann RM，et al.，Possible mechanism involving T-lymphocyte response to non-structural protein 3 in viral clearance in acute hepatitis C virus infection.Lancet，1995，346：1006-1007)。 

腺病毒(adenovirus，下文简称为Ad)可以引起广泛的人类疾病，包括呼吸道感染，胃肠炎、咽炎、角膜结膜炎、脑膜脑炎、急性出血性膀胱炎、肝炎等等。目前，已鉴定出58种不同的人腺病毒血清型，并根据免疫学、生物学和生化特征进一步划分为A-F六个组。腺病毒是一种无外壳的双链DNA病毒，基因组长约36kb，衣壳(capsid)呈规则的20面体结构，直径约80-100nm。衣壳含有240个六邻体(hexon)、12个五邻体(penton)及12根纤毛(fiber)，除此之外还有其他一些小蛋白，如VI、VIII、IX、IIIa和IVa2等。目前，腺病毒的诊断方法主要包括病毒的分离、血清学检测、病毒DNA检测以及酶联免疫吸附分析(ELISA)等。六邻体常被用于腺病毒的免疫学诊断，此外，纤毛的球状突起和蛋白IX也是进行腺病毒诊断的重要候选抗原(参见：Bauer U，Flunker G，Bruss K，et al.Detection of antibodies against adenovirus protein IX，fiber，and hexon in human sera by immunoblot assay.J Clin Microbiol 2005，43：4426-4433)。 

但是，目前尚未发现腺病毒的非结构蛋白具有免疫原性，并将其作为免疫原来制备抗体，从而进行腺病毒检测或者利用该非结构蛋白来检 测腺病毒抗体。 

发明内容

本发明是基于下述发现作出的：即腺病毒非结构蛋白，例如DNA结合蛋白(DNA-binding protein，DBP)，具有免疫原性。因而可以将其作为免疫原来制备抗体，并将其用于检测腺病毒抗体。 

因此，在本发明的第一方面，提供了一种腺病毒非结构蛋白，其中所述非结构蛋白具有免疫原性，并且其中所述非结构蛋白选自氨基酸序列包含序列2或4或者由所述序列组成的DNA结合蛋白和氨基酸序列包含序列6或由所述序列组成的蛋白(下文简称该蛋白为117aa)。 

在本发明的第二方面，提供了一种核苷酸序列，其编码本发明第一方面的腺病毒非结构蛋白。优选地，所述核苷酸序列包含序列1、3或5或其简并序列，或者由所述序列组成。 

在本发明的第三方面，提供了一种表达载体，所述载体包含本发明第二方面的核苷酸序列。 

在本发明的第四方面，提供了一种宿主细胞，其包含本发明第三方面的表达载体。

在本发明的第五方面，提供了一种抗体，其能够结合本发明第一方面的腺病毒非结构蛋白。 

在本发明的第六方面，提供了本发明第五方面的抗体在制备用于检测受试者腺病毒感染的诊断剂中的用途。 

在本发明的第七方面，提供了一种用于检测受试者腺病毒感染的试剂盒，所述试剂盒包含本发明第五方面的抗体。 

在本发明的第八方面，提供了一种检测腺病毒抗体的方法，包括使本发明第一方面的腺病毒非结构蛋白与受试者的样本相接触。 

在本发明的第九方面，提供了一种用于检测腺病毒抗体的试剂盒，所述试剂盒包含本发明第一方面的腺病毒非结构蛋白。 

非结构蛋白例如DNA结合蛋白的表达先于结构蛋白例如六邻体蛋白的表达。利用这一特性，非结构蛋白可用于腺病毒感染的早期诊断。此外，在进行人群腺病毒感染的血清流行病学的筛查时，用结构蛋白并结合非结构蛋白进行检测可以提高筛查的敏感性。 

附图说明