[发明专利]一种三角帆蚌人工催产及授精的方法

说明书

技术领域

本发明属于贝类人工繁殖技术领域，本发明具体公开了一种三角帆蚌人工催产及授精的方法。

背景技术

三角帆蚌（Hyriopsis cumuingii）隶属于软体动物门，双壳纲，真瓣鳃目，蚌科，为我国特有种，是我国淡水育珠的优质品种之一。自二十世纪80年代起，三角帆蚌取代褶纹冠蚌（Cristaria plicata）、背角无齿蚌（Anodonta woodiana woodiana）等品种在我国淡水育珠产业上广泛使用，这使得我国淡水珍珠产量一举超越了日本，成为世界淡水珍珠第一生产大国和出口大国，并一直持续至今。中国珠宝协会的统计数据表明：我国淡水珍珠年产量约占世界珍珠产量的90%。目前，世界70%以上的淡水珍珠由三角帆蚌培育而成。三角帆蚌在我国淡水珍珠养殖业中，乃至世界珍珠养殖业中的地位举足轻重。

二十世纪70年代末，我国就突破了三角帆蚌人工繁殖技术。在生产上，通常采用大型池塘培育三角帆蚌亲本，让其自然受精，再从中挑选外鳃丝怀有成熟钩介幼虫的雌蚌进行人工采苗。但由于亲本性腺发育不同步，需要从大量的亲本中、多次挑选成熟雌蚌用于人工繁育，不仅工作量大，而且效率低。国内外对三角帆蚌的受精方式和过程尚不十分清楚，传统亲本培育方式无法实现三角帆蚌的人工受精，这限制了一些基础应用研究，如多倍体育种、家系选育等研究的开展。

贝类的多倍体育种研究为海洋贝类养殖业的繁荣和发展作出了巨大贡献，尤其是三倍体贝类养殖取得了显著的经济效益。美国通过人工多倍体诱导成功获得了三倍体牡蛎，并在生产上有广泛的应用，目前50%以上的养殖牡蛎是三倍体，养殖效益显著增加。理论上由于三倍体贝类性腺不发育或发育不良，其能量大部分用于生长，生长速度、个体规格显著高于二倍体贝类。众所周知，培育珍珠的大小很大程度上依赖于有大规格的育珠蚌作为载体。如果在淡水珍珠养殖生产上能使用三倍体三角帆蚌，我国的淡水珍珠养殖业将再次出现质的飞跃。而开展多倍体育种研究的首要条件是实现物种的人工授精，进而在受精卵的不同发育时期使用诱导剂，如6-DMAP、细胞松弛素等进行人工倍性诱导。由于海水贝类行体外受精，通常采用物理的（如温度、阴干、流水刺激）、化学的方法（如氨水）诱导或解剖分别获得成熟的精子和卵子，混合后获得受精卵，开展多倍体育种研究比较容易实现，但对实验动物造成严重的伤害甚至死亡。此外，家系选育是遗传育种研究中重要而有效的技术方法之一，由于三角帆蚌亲本个体发育不同步、不能同时受精的问题，建立同一批的家系难度较大。

与海水贝类不同，三角帆蚌具有蚌科物种典型的繁殖特性：雄蚌的精子和雌蚌的卵子需要在雌蚌的外鳃丝上受精发育，其受精过程更为复杂。由于基础繁殖生物学研究薄弱，目前尚无法人工控制其受精过程。实现人工授精是三角帆蚌全人工繁殖的关键技术瓶颈之一，也是开展三角帆蚌多倍体育种、家系选育研究的基本条件。因此，研究三角帆蚌人工授精的方法具有重要理论价值和一定的应用前景。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术中存在的不足，提供一种避免了对实验动物的伤害，突破了三角帆蚌的全人工繁育中关键技术瓶颈，为开展三角帆蚌多倍体育种、家系选育研究提供基本条件的一种三角帆蚌人工催产及授精的方法。

按照本发明提供的技术方案，所述三角帆蚌人工催产及授精的方法包括以下步骤：

a、 选取贝壳完整无损、喷水有力、健康的三角帆蚌4~6龄亲本并鉴别其性别；具体通过比较内外鳃丝的间隔宽度鉴别雌雄：外鳃丝宽度致密，且显著小于内鳃丝宽度者为雌蚌，内外鳃丝间隔宽度一致者为雄蚌；

b、在鉴别完雌雄性别的亲本的贝壳表面进行标记，并记录标记后亲本个体相关信息；

c、将标记后的亲本按照雌雄性别隔离进行培育池放养培育，放养密度均为5~10只/平方米，培育池水位控制在10~15厘米，利用高位池自流水作为水源保持培育池内为流动水，培育池内流动水的流速控制在0.5~3米/分钟；

d、亲本隔离培育至5月中旬，当近5日平均水温达18~25℃，检查雌蚌外鳃丝状态；当外鳃丝完全膨胀并充满两侧外套腔时，选出作为待孕雌蚌；

e、将选出的待孕雌蚌随机分成两组隔离培育，一组为自然受精组，另一组为人工授精组；自然受精组按雌雄性比为1~4：1加入隔离培育后的雄蚌，每天定时检查自然受精组的待孕雌蚌外鳃丝，当累计有80%的雌蚌受精，提示开始进行人工授精组雄蚌的催产；