[发明专利]内表面反相限进填料的合成及应用

说明书

技术领域

本发明涉及限进填料的合成及应用领域，尤其涉及一种内表面反相限进填料的合成及应用。

背景技术

生物样品（如血浆、尿液等）进行HPLC分析时，样品的制备常常是整个分析过程中的限速步骤和瓶颈步骤，直接影响了分析结果的精密度和准确性。目前通常采用离线的方法对生物样品进行预处理，如蛋白质沉淀（PP）；液液萃取（LLE）；固相萃取（SPE）；膜萃取等，但这些方法操作繁琐、耗时费力、耗费试剂、用样量大、准确度和精密度不高、存在待测物与蛋白质的共沉淀现象。而近年来发展起来的限进填料，由于其允许血浆等生物样品不需要进行前处理而直接进入到色谱柱中进行HPLC分析，因而受到了很大的关注。

限进填料也称为限制进入固定相或限制进入吸附剂或浸透限制固定相等，由1991年Desilets等引入，是进行全自动样品前处理的在线萃取技术之一。这类填料同时具有针对蛋白质等大分子物质的体积排阻作用和针对小分子分析物的萃取和富集功能。此类填料包括：⑴内表面反相填料；⑵烷基二醇硅胶填料；⑶键合相多孔硅胶填料；⑷半渗透表面填料；⑸蛋白涂渍硅胶填料；⑹混合功能填料；⑺屏蔽疏水相填料。其中内表面反相填料是出现最早，应用较广泛的一类限进填料。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种操作简便的内表面反相限进填料的合成。

本发明所要解决的另一个技术问题是提供该内表面反相限进填料的应用。

为解决上述问题，本发明所述的内表面反相限进填料，其特征在于：该限进填料是外表面具有蛋白排阻性能而内表面具有反相性能的限进填料，其具有如下结构式，

式中n=500~2300。

如上所述的内表面反相限进填料的合成，包括以下步骤：

⑴氨丙基烷化硅胶的合成：首先将粒径为5μm的多孔硅胶经盐酸活化后，在150~200℃下真空干燥4~6h，得活化硅胶；然后，将所述活化硅胶加入无水甲苯在110~120℃温度下回流，共沸除去残留的水分后在N₂保护下，加入3-氨丙基三乙氧基硅烷，在110~120℃下回流反应4~6h；最后，经冷却、清洗，在60~80℃下真空干燥4~6h，即得氨丙基烷化硅胶；

⑵内表面反相限进填料的合成：在N₂保护下，将所述步骤⑴所得的氨丙基烷化硅胶中加无水甲苯，在冰浴下加入1,6-亚己基二异氰酸酯；然后移除冰浴，加热到60~80℃，反应1.5~3h后冷却至室温，过滤，得到反应产物和反应中过量的1,6-亚己基二异氰酸酯；用无水甲苯洗去所述反应中过量的1,6-亚己基二异氰酸酯，在60~80℃下真空干燥2~4h；其次，将分子量为86000的聚乙烯醇溶于干燥的氯化锂-二甲基亚砜（LiCl-DMSO）系统中，并加入到所述反应产物中，在N₂保护下，搅拌加热到70~90℃，反应2~4h后冷却至室温，得到外表面键合有亲水基团的中间产物；最后，将己氨溶于无水吡啶中，并加入到所述外表面键合有亲水基团的中间产物中，在60~80℃温度下反应10~14h后冷却，得到外表面键合有亲水基团、内表面键合有疏水基团的终产物，该终产物依次经过滤、洗涤、60~80℃下真空干燥2~4h，即得内表面反相限进填料。

所述步骤⑴中的盐酸质量浓度为3.65%。

所述步骤⑴、步骤⑵中的无水甲苯、无水吡啶和无水二甲基亚砜均经CaH₂干燥。

所述步骤⑴中活化硅胶分别与无水甲苯、3-氨丙基三乙氧基硅烷的质量体积比为1：30~40、1：0.6~1.0。

所述步骤⑵中氨丙基硅烷化硅胶分别与所述无水甲苯、所述1,6-亚己基二异氰酸酯的质量体积比为1：15~25、1：0.8~1.0。

所述步骤⑵中氨丙基硅烷化硅胶分别与所述聚乙烯醇、所述己胺的质量比为1：0.04~0.05、1：0.4~0.5。

所述步骤⑵中聚乙烯醇与所述干燥LiCl-DMSO系统的质量体积比为1：350~450；所述己胺与干燥吡啶的质量体积比为1：25~35。

所述步骤⑵氯化锂-二甲基亚砜（LiCl-DMSO）系统中氯化锂（LiCl）占二甲基亚砜（DMSO）的质量分数为4%~8%。

如上所述的内表面反相限进填料在血浆样品直接进样分析中的应用。

本发明与现有技术相比具有以下优点：