[发明专利]检测b型流感嗜血杆菌发酵液不同发酵时间剩余的葡萄糖浓度的方法

权利要求书

1.检测b型流感嗜血杆菌发酵液不同发酵时间剩余的葡萄糖浓度的方法，其特征在于：它包括以下步骤： 

A、以任一时间段的Hib发酵液的样品作为供试品，取供试品2ml置于250ml锥形瓶中，加水25ml，精密加入碱性铜试液25ml；

B、加热回流使其在3分钟内沸腾，并连续沸腾5分钟，迅速冷却至室温，期间保证瓶中氧化亚铜不与空气接触，后立即加入25%碘化钾溶液15ml，摇匀，随振摇随缓缓加入硫酸溶液（1→5）25ml；

C、待二氧化碳停止放出后，立即用0.1mol/L的硫代硫酸钠滴定液滴定，滴定至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失；

D、取2ml水做一空白试验；

E、发酵液零小时样品葡萄糖含量测定；

F、以发酵液零小时样品消耗滴定液的体积为100%，其余样品消耗滴定液体积与发酵零小时样品消耗的滴定液体积进行比较，得到发酵液不同时段剩余葡萄糖含量占初始葡萄糖含量的百分比；

其中，所述的发酵液零小时样品葡萄糖含量测定测定包括以下子步骤：

    1）、取2ml发酵液零小时样品，即加糖不加菌的样品，置于250ml锥形瓶中，加水25ml，精密加入碱性铜试液25ml；

2）、加热回流使其在3分钟内沸腾，并连续沸腾5分钟，迅速冷却至室温，期间保证瓶中氧化亚铜不与空气接触，立即加25%碘化钾溶液15ml，摇匀，随振摇随缓缓加入硫酸溶液（1→5）25ml；

3）、待二氧化碳停止放出后，立即用0.1mol/L的硫代硫酸钠滴定液滴定，滴定至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失。