[发明专利]产酸克雷伯菌菌株及其应用和三唑磷农药残留降解菌剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种细菌及其应用，尤其涉及一种细菌菌株及其在降解农药残留中的应用。

背景技术

目前，化学农药已广泛应用于现代农药生产和卫生防疫，化学农药的大量使用，大大促进了现代农业生产的发展。然而，化学农药的不合理使用甚至滥用，导致大量化学农药流失到生态环境中，对生态系统造成了严重的危害；而且，化学农药的大量使用，以及生态环境中残留的化学农药，容易导致生产的农产品中农药残留的超标，影响农产品的品质，并对人们的身体健康带来严重威胁，对农产品的出口产生消极影响。

有机磷杀虫剂是我国使用最广泛、用量最大的一类杀虫剂，其品种繁多。从20世纪50年代，有机磷杀虫剂在我国开始生产使用，此后被广泛用于粮食、蔬菜和果树等多种作物。有机磷杀虫剂属于神经毒物，主要抑制血液和组织中乙酰胆碱酯酶的活性，导致神经递质、乙酰胆碱的大量蓄积，从而阻断了神经传导，引起中枢神经系统中毒。大多数品种对人、畜毒性偏高，有些品种属于剧毒，如甲拌磷、甲胺磷、内吸磷等。

农业部的调查统计表明，该类农药是目前我国出口蔬菜、水果中主要的三类农药残留之一。欧盟2007/12/EC农药残留标准以及日本2006年出台“肯定列表制度”，都对有机磷杀虫剂农药残留限量作出严格的规定，其中规定有机磷农药的检出限量小于0.02mg/Kg，这些残留量限定，严重影响了我国农产品的出口。

随着人们生活水平的提高以及环境保护意识的增强，全社会对食品安全以及生态环境保护的关注度逐步提高。但是，根据我国的农业生产现状以及人口状况来看，停止或大量减少农药的使用，大量生产无农药残留的绿色农产品，在目前及今后一段时间是行不通的，农药作为控制病虫草的有效手段还将继续在农业生产中发挥不可替代的作用。因此，在农业生产上，如何解决农药使用与残留这个两难问题成为研究热点。

大量研究表明，以微生物修复为理论基础的农药残留降解菌技术为降低农产品和农业生产环境中的农药残留物提供了可行的途径。也有研究表明，许多微生物还具有促进作物生长，修复局部区域生态环境的作用。该技术不仅高效安全，而且经济实用，操作简便，目前已成为去除农药残留污染的一种重要方法。然而，微生物修复的前提是筛选高效安全的微生物资源，制备出使用方便的菌剂，并进行合理化地应用，这都是本领域技术人员需要面临的技术难题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：针对现有技术的不足，提供一种生产成本低、农药去除效果高、无毒、环保的产酸克雷伯菌菌株及该菌株的应用，具体还提供一种低成本、操作简便、效果好的三唑磷农药残留降解菌剂及其制备方法。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

一种产酸克雷伯菌菌株，所述产酸克雷伯菌(Klebsiella oxytoca)菌株为保藏于中国典型培养物保藏中心、且保藏号为CCTCC NO：M2011350的菌株。该菌株的保藏单位为中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，保藏单位地址位于中国武汉大学，保藏日期为2011年10月12日，该菌株被命名为产酸克雷伯菌TDB-1(Klebsiella oxytoca TDB-1)。

上述的产酸克雷伯菌CCTCC M 2011350通过以下方法筛选得到：将采自农田灌溉水渠的水样2.0mL加入120mL基础液体培养基(MM培养基)中，培养24h后，取1％接种到含三唑磷10mg/L的MM培养基中，30±2℃，180rpm，培养24h后，取300μL菌液稀释涂布到以三唑磷50mg/L为唯一碳源的基础固体培养基(MMS培养基)中，培养至菌落出现，挑取菌落形态不同的菌，分别接种到含三唑磷50mg/L为唯一碳源的MM培养基中，30±2℃、180rpm，培养24d后，取1％分别接种到以三唑磷100mg/L为唯一碳源的MM培养基中。24h后检测农药浓度，以含相同浓度的三唑磷，相同培养条件不接种菌的培养基为对照。选择降解率最大的菌株进行后续研究。将该菌株接种于100mL MM培养基中培养，30±2℃、180rpm，培养，梯度稀释平板培养法测定菌株生物量，后续实验中菌液浓度调整至约10⁹cfu/mL。

上述的产酸克雷伯菌CCTCC M 2011350优选为具有以下主要特征的菌株：

球状，具有荚膜，G^-，V-P反应阳性，甲基红反应阳性，明胶液化阴性，吲哚反应阳性，最适生长温度为25℃～35℃，最适生长pH值为5～9，16S rDNA序列长度为1505bp，在Genbank中的登录号为JQ068819。