[发明专利]利用毕赤酵母生产猪Gp96蛋白的方法及专用培养基

权利要求书

1.一种发酵培养基，由如下配比的7种物质组成：酵母膏∶蛋白胨∶生物素∶CaSO₄∶MgSO₄∶NH₄CL∶甲醇的配比为(0.3-1.0)g∶(0.6-1.5)g、4x10^-5g、(0.04-0.08)g∶(0.7-1.4)g∶(0.2-0.5)g∶(0.2-1.5)ml。

2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于：所述酵母膏∶蛋白胨∶生物素∶CaSO₄∶MgSO₄∶NH₄CL∶甲醇的配比为(0.3或0.5)g∶(0.6或1.0)g∶4x10^-5g∶(0.04、0.06或0.08)g∶(0.7、1.0或1.4)g∶(0.2或0.4)g∶(0.2、1.0或1.5)ml；

所述发酵培养基的pH值为5.5-6.5。

3.一种发酵培养基，由溶质和溶剂组成，所述溶质由如下终浓度的7种物质组成：

所述酵母膏在所述发酵培养基中的终浓度为0.3％-1.0％(质量百分含量)；

所述蛋白胨在所述发酵培养基中的终浓度为0.6％-1.5％(质量百分含量)；

所述生物素在所述发酵培养基中的终浓度为4x10^-5％(质量百分含量)；

所述CaSO₄在所述发酵培养基中的终浓度为0.04％-0.08％(质量百分含量)；

所述MgSO₄在所述发酵培养基中的终浓度为0.7％-1.4％(质量百分含量)；

所述NH₄CL在所述发酵培养基中的终浓度为0.2％-0.5％(质量百分含量)；

所述甲醇在所述发酵培养基中的终浓度为0.2％-1.5％(体积百分含量)。

4.根据权利要求3所述的培养基，其特征在于：所述酵母膏在所述发酵培养基中的终浓度为0.3％或0.5％(质量百分含量)；

所述蛋白胨在所述发酵培养基中的终浓度为0.％6或1.0％(质量百分含量)；

所述生物素在所述发酵培养基中的终浓度为4x10^-5％(质量百分含量)；

所述CaSO₄在所述发酵培养基中的终浓度为0.04％、0.06％或0.08％(质量百分含量)；

所述MgSO₄在所述发酵培养基中的终浓度为0.7％、1.0％或1.4％(质量百分含量)；

所述NH₄CL在所述发酵培养基中的终浓度为0.2％或0.4％(质量百分含量)；

所述甲醇在所述发酵培养基中的终浓度为0.2％、1.0％或1.5％(体积百分含量)；

所述溶剂为水。

5.根据权利要求3或4所述的培养基，其特征在于：所述发酵培养基的pH值为5.5-6.5。

6.权利要求1或2所述的培养基的制备方法，包括如下步骤：将所述7种物质按照所述配比混合，得到所述培养基；

或权利要求3-5中任一所述的培养基的制备方法，包括如下步骤：将所述溶质中的7种物质均溶于水达到所述终浓度，得到所述培养基。

7.一种制备Gp96N蛋白的方法，为在权利要求1-5中任一所述的发酵培养基中发酵工程菌p.pastoris-X33/pPICZαA/Gp96/12，收集发酵产物，即得到Gp96N蛋白；

所述工程菌p.pastoris-X33/pPICZαA/Gp96/12为将Gp96N蛋白的编码基因通过重组载体导入p.pastoris-X33中得到的重组菌；

所述重组载体为将Gp96N蛋白的编码基因插入pPICZαA载体中得到的重组载体；

所述Gp96N蛋白为猪Gp96N蛋白，所述猪Gp96N蛋白的氨基酸序列为序列表中的序列1。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：

所述猪Gp96N蛋白编码基因的核苷酸序列为序列表中的序列2；

所述发酵的温度为28℃，所述发酵的时间为72h-80h；所述发酵的pH为6.5。