[发明专利]用于检测大前庭水管相关耳聋基因常见突变的探针及试剂盒

权利要求书

1.用于检测常染色体隐性遗传大前庭水管相关耳聋基因SLC26A4的常见突变IVS7-2A＞G的实时荧光定量MGB探针，其特征在于野生型探针位于常染色体隐性遗传大前庭水管相关耳聋基因SLC26A4序列SEQ ID NO：1所示的相关区域中：IVS7-2A＞G位于SLC26A4基因第7内含子末端距离第8外显子2个碱基处，野生型探针位于第23403bp-23425bp；突变型探针位于如常染色体隐性遗传大前庭水管相关耳聋基因SLC26A4序列SEQ ID NO：1所示的相关区域中：IVS7-2A＞G突变型探针位于第23404bp-23425bp。

2.根据权利要求1所述实时定量MGB探针，其特征在于在所述野生型探针片段的5’末端标记了荧光报告基团VIC、3’末端标记了非荧光淬灭基团MGB；在所述突变型探针片段的5’末端标记了荧光报告基团FAM、3’末端标记了非荧光淬灭基团MGB。

3.根据权利要求1所述实时定量MGB探针，其特征在于所述野生型探针序列为：

5′VIC-TCTTTTGTTTTATTTCGACGAT-MGB3′；

所述突变型探针序列为：

5′FAM-CTTTTGTTTTATTTCGACGAT-MGB3′。

其中，突变型及野生型探针的区别在于：IVS7-2A＞G突变野生型探针第23419bp碱基A被替换为G。

4.一种用于检测常染色体隐性遗传大前庭水管相关耳聋基因SLC26A4的常见突变IVS7-2A＞G的试剂盒，该试剂盒包括：

(1)提取血样DNA的试剂；

(2)PCR扩增反应试剂混合液；

(3)用于扩增所述SLC26A4基因常见突变的野生型MGB探针、突变型MGB探针及对应的正向引物、反向引物的混合液；

(4)使用说明书。

5.权利要求4所述试剂盒，其特征在于所述正、反向引物位于常染色体隐性遗传大前庭水管相关耳聋基因SLC26A4序列SEQ ID NO：1所示的相关区域中：针对IVS7-2A＞G突变的正向引物位于第23360bp-23391bp，反向引物位于第23438bp-23461bp。

6.权利要求4所述试剂盒，其特征在于所述正、反向引物的序列如下：

正向引物F：

5′GTTGACAAACAAGGAATTATTAAAACCAATGG3′；

反向引物R：

5′TCCAGGTTGGCTCCATATGAAATG3′。

7.根据权利要求4所述试剂盒，其特征在于所述PCR扩增反应试剂混合液是2×Mastermix混和液；所述野生型探针、突变型探针及对应的正向引物、反向引物混和液是Assaymix混和液；所述提取血样DNA的试剂为提取足根血DNA的溶液I，其主要成分为Chelex。

8.根据权利要求4所述试剂盒，其特征在于所述PCR扩增反应试剂混合液是2×Mastermix混和液；所述野生型探针、突变型探针及对应的正向引物、反向引物混和液是Assaymix混和液；所述提取血样DNA的试剂为外周血DNA提取试剂。

9.权利要求1至3中任一项所述MGB探针在体外检测常染色体隐性遗传大前庭水管相关SLC26A4基因常见突变IVS7-2A＞G中的用途。

10.权利要求4至8中任一项所述试剂盒在体外检测常染色体隐性遗传大前庭水管相关SLC26A4基因常见突变IVS7-2A＞G中的用途。