[发明专利]一种用于治疗糖尿病的融合蛋白及其制备方法

权利要求书

1.一种用于治疗糖尿病的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白为N个Exendin-4-Linker与人IgG Fc突变体重组成的融合蛋白；

其中，Linker为一组由疏水氨基酸组成的柔性肽段，其氨基酸的个数少于25个；

其中，人IgG Fc突变体为IgG1 Fc、IgG2 Fc或IgG4 Fc突变体；

其中，N为2-8个。

2.根据权利要求1所述的一种用于治疗糖尿病的融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白为2个Exendin-4-Linker与人IgG1 Fc突变体重组成的融合蛋白。

3.根据权利要求1所述的一种用于治疗糖尿病的融合蛋白，其特征在于：所述人IgG Fc突变体为IgG1 Fc突变体；IgG1 Fc突变体的氨基酸的突变位置为Glu233Pro/Leu234Val/Leu235Ala/ΔGly236/Ala327Gly/Ala330Ser/Pro331Ser中的一个突变位置或者至少两个位置的组合突变位置， 其中突变位置编号依照EU编号系统。

4.根据权利要求1所述的一种用于治疗糖尿病的融合蛋白，其特征在于：所述Linker为柔性肽段（Gly₄Ser）n，n=1-5或柔性肽段（Ala₃Ser₂）n，n=1-5。

5.根据权利要求2所述的一种用于治疗糖尿病的融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白为2个Exendin-4-Linker与人IgG1 Fc突变体重组成的融合蛋白；

其中，Linker为柔性肽段（Gly₄Ser）n，n=1-5；

其中，IgG1 Fc突变体的氨基酸的突变位置为Glu233Pro/Leu234Val/Leu235Ala/ΔGly236/Ala327Gly/Ala330Ser/Pro331Ser的组合突变位置，其中突变位置编号依照EU编号系统。

6.根据权利要求5所述的一种用于治疗糖尿病的融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白为2个Exendin-4-Linker与人IgG1 Fc突变体重组成的融合蛋白；

其中，两端分别与Exendin-4连接的Linker为柔性肽段（Gly₄Ser）n，n=3；

其中，一端与Exendin-4连接且另一端与人IgG1 Fc突变体连接的Linker为柔性肽段（Gly₄Ser）n，n=1；

其中，IgG1 Fc突变体的氨基酸的突变位置为Glu233Pro/Leu234Val/Leu235Ala/ΔGly236/Ala327Gly/Ala330Ser/Pro331Ser的组合突变位置，其中突变位置编号依照EU编号系统。

7.根据权利要求1所述的一种用于治疗糖尿病的融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白的表达载体为pOptiVEC-TOPO， 所述融合蛋白在哺乳动物细胞中表达，所述细胞选自CHO细胞，HeLa细胞和BHK细胞。

8.根据权利要求1-7中任意一项所述的一种用于治疗糖尿病的融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白在治疗Ⅰ型、Ⅱ型糖尿病的应用。

9.一种用于治疗糖尿病的融合蛋白的制备方法，其特征在于：该方法包括在适于表达该融合蛋白的条件下培养权利要求6的宿主细胞，宿主细胞经细胞培养、离心后，上清液分别用亲和层析、离子交换层析和分子筛层析纯化；

其中，亲和层析中使用的是rProtein A Sepharose FF亲和填料；

其中，离子交换层析中使用的是Q Sepharose FF填料；

其中，分子筛层析中使用的是Superdex 200填料。