[发明专利]提高球孢白僵菌几丁酶基因抗病性以及利用其培育抗病植物的方法

权利要求书

1.一种提高球孢白僵菌几丁酶基因抗病性的方法，其特征在于，在球孢白僵菌几丁酶基因中添加家蚕几丁酶基因的几丁质结合结构域，提高球孢白僵菌几丁酶基因的抗病性。

2.根据权利要求1所述提高球孢白僵菌几丁酶基因抗病性的方法，其特征在于，包括如下步骤：

　（1）获得球孢白僵菌几丁酶基因Bbchit1：以球孢白僵菌基因组DNA为模板，以序列1和序列2为引物进行扩增，扩增产物与pMD18载体连接后转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，筛选阳性克隆获得Bbchit1基因序列；

　（2）获得家蚕几丁质酶基因的几丁质结合结构域SwChBD：利用家蚕4至5龄蜕皮期的mRNA进行反转录合成cDNA；以cDNA为模板，以序列3和序列4为引物进行扩增，扩增产物克隆入pBS载体，转化大肠杆菌XL-blue感受态细胞，筛选阳性克隆获得SwChBD序列；

　（3）构建家蚕几丁酶基因的几丁质结合结构域SwChBD与球孢白僵菌几丁酶基因Bbchit1的融合基因SwBbchit1：用KpnI与Xba I双酶切pMD18-Bbchit1质粒，回收Bbchit1基因片段，然后克隆入用SpeI与EcoRI消化的pBS-SwChBD质粒，得到pBS-SwBbchit1载体；转化大肠杆菌后筛选阳性克隆即获得抗病性提高的新基因SwBbchit1序列。

3.根据权利要求2所述的提高球孢白僵菌几丁酶基因抗病性的方法，其特征在于，将权利要求2的步骤（1）获得的球孢白僵菌几丁酶基因Bbchit1与步骤（2）获得的家蚕几丁酶基因的几丁质结合结构域SwChBD融合，构建融合基因SwBbchit1，获得较球孢白僵菌几丁酶基因抗病性更好的新基因。

4.一种利用球孢白僵菌几丁酶基因抗病性培育抗病植物的方法，其特征在于，构建球孢白僵菌几丁酶基因Bbchit1的植物表达载体后，利用基因工程技术转入植物，获得抗病性更好的转基因植物。

5.根据权利要求4所述利用球孢白僵菌几丁酶基因抗病性培育抗病植物的方法，其特征在于包括以下步骤：

1）将权利要求2步骤（3）获得的新基因序列SwBbchit1可操作地插入表达载体中，构建植物表达载体，获得组成型表达SwBbchit1基因的植物表达载体；

2）将上述步骤（1）获得的植物表达载体转化根癌农杆菌，获得转化子；

3）将上述步骤（2）获得的农杆菌转化子转化棉花或番茄，经组织培养和抗性筛选获得转基因棉花或番茄。

6.一种利用球孢白僵菌几丁酶基因抗病性培育抗病植物的方法，其特征在于，将权利要求5所述SwBbchit1基因的植物表达载体转入棉花或番茄基因组，实现该基因的组成型表达，进一步提高棉花或番茄的抗病能力。

7.一种利用球孢白僵菌几丁酶基因抗病性培育抗病植物的方法，其特征在于，将权利要求5所述SwBbchit1基因的植物表达载体在制备转基因抗病植物中的应用。