[发明专利]海湾扇贝抗热相关金属硫蛋白基因标记及其辅助育种方法有效
| 申请号： | 201210039739.4 | 申请日： | 2012-02-21 |
| 公开（公告）号： | CN102634514A | 公开（公告）日： | 2012-08-15 |
| 发明（设计）人： | 宋林生;杨传燕;王玲玲;邱丽梅;周智 | 申请（专利权）人： | 中国科学院海洋研究所 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12N15/10;C12Q1/68;A01K61/00 |
| 代理公司： | 沈阳科苑专利商标代理有限公司 21002 | 代理人： | 周秀梅;李颖 |
| 地址： | 266071*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 海湾 扇贝 抗热 相关 金属 蛋白 基因 标记 及其 辅助 育种 方法 | ||
1.一种海湾扇贝抗热相关金属硫蛋白基因标记，其特征在于：海湾扇贝抗热相关金属硫蛋白基因标记为序列表SEQ ID No.1碱基序列所示，起始密码子上游第337个碱基A为抗热基因位点。
2.按权利要求1所述海湾扇贝抗热相关金属硫蛋白基因标记，其特征在于：海湾扇贝抗热相关金属硫蛋白基因标记的获得，按如下步骤获得：
1)海湾扇贝金属硫蛋白基因启动子区部分序列的克隆；以海湾扇贝闭壳肌的总DNA为模板，根据已知的金属硫蛋白基因序列在启动子区设计引物AiMT1pF和AiMT1pR扩增得到DNA序列，待用；AiMT1pF 5′-atgtaagggcacttatgcttgatctttagt-3′和AiMT1pR 5′-agcagtcaggaccagcacagcca-3′；
2)抗热相关金属硫蛋白基因标记的筛选；对来自抗热群体和热敏感群体的各6个个体的12个克隆进行测序，其多态性位点为-488C/T，-450A/C，-447G/C，-440A ins-del，-431T/C，-430G/A，-428A/T，-375T/C，-363T/G，-337A/C，-311T/A，-310A/T，-298G/T，-265A/G，-253A/G，-251T/C和-118C/T；再提取50个热敏感个体和50个抗热个体的基因组DNA后，针对-375T/C位点多态，首先PCR扩增金属硫蛋白启动子区序列，然后选用Mse I对PCR产物进行酶切，聚丙烯酰胺凝胶电泳后，得-375T/T，-375T/C和-375C/C 3种基因型，以-337A/C位点多态，利用Bi-PASA PCR进行分析，琼脂糖凝胶电泳后，得-337A/A，-337A/C和-337C/C 3种基因型，经Chi-square Test分析，-337A/A个体在抗热群体中出现的频率显著高于敏感群体，即-337A/A为抗热相关的金属硫蛋白基因标记。
3.一种海湾扇贝抗热相关金属硫蛋白基因标记辅助育种方法，其特征在于：以在抗热群体中高频出现的金属硫蛋白基因型作为抗热相关金属硫蛋白基因标记，将携带这种抗热相关基因标记的海湾扇贝进行繁殖，培育后代，克隆得到后代中的金属硫蛋白基因启动子区序列，研究其多态性；同时进行热胁迫处理实验，研究抗热相关金属硫蛋白基因标记的遗传规律及其与海湾扇贝耐热能力的关系，从中筛选出既带有抗热相关金属硫蛋白基因标记，耐热能力又显著提高的贝苗进行多代繁殖和培育后即可建立抗热新品种。
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