[发明专利]环介导等温扩增禽呼肠孤病毒的引物、禽呼肠孤病毒的检测试剂盒及检测方法无效
| 申请号： | 201210040492.8 | 申请日： | 2012-02-22 |
| 公开（公告）号： | CN102586479A | 公开（公告）日： | 2012-07-18 |
| 发明（设计）人： | 张琳;张秀美;胡北侠;杨少华;颜世敢;许传田 | 申请（专利权）人： | 山东省农业科学院畜牧兽医研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 济南泉城专利商标事务所 37218 | 代理人： | 李桂存 |
| 地址： | 250100 *** | 国省代码： | 山东;37 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 环介导 等温 扩增 禽呼肠孤 病毒 引物 检测 试剂盒 方法 | ||
1.一种环介导等温扩增禽呼肠孤病毒的引物，其特征在于共包括外侧引物对、内侧引物对和环形引物对三对特异性引物，序列如下：
外侧引物对：
上游引物F3：5’- ATGCTGCGTATGCCTCCC-3’,
下游引物B3： 5’- CCAGCTCACGATGGAAGAC-3’,
内侧引物对:
上游引物FIP：
5’- ACGTAGCTTGCAAATCACCACCTTTTGTGTAACGGTGCGACTGCT-3’,
下游引物BIP：
5’- CATAATTGCATATTGGCCTTATCTTTTTTACGTGCAGCGTCCGCCTT-3’,
环形引物对:
上游引物LF：5’- GCCTGACAATGAACGTTACC-3’,
下游引物LB： 5’- AGCGGCGGGTGGTGGTTTC-3’，
外侧引物对、内侧引物对、环形引物对的摩尔比为1:8:4。
2.一种禽传染性支气管炎病毒的检测试剂盒，其特征在于包括环介导等温扩增反应液，环介导等温扩增反应液中含有权利要求1中的三对特异性引物。
3.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于每24μL环介导等温扩增反应液中含有外侧引物对上游引物和下游引物各5pmol，内侧引物对上游引物和下游引物各40pmol，环形引物对上游引物和下游引物各20pmol。
4.根据权利要求2或3所述的检测试剂盒，其特征在于每24μL环介导等温扩增反应液中还含有Tris-HCl 20mM、KCl 10mM、(NH4)2SO4 10mM、MgSO4 4-16mM、Tween20 0.1%、钙黄绿素0.05 mM、MnCl2 0.6mM、AMV反转录酶 0.2U、甜菜碱 0.8M、脱氧核苷酸dNTPs 1.4mM、Bst聚合酶8U。
5.根据权利要求2或3所述的检测试剂盒，特征在于每24μL环介导等温扩增反应液中还含有Tris-HCl 20mM、KCl 10mM、(NH4)2SO4 10mM、MgSO4 8mM、Tween20 0.1%、钙黄绿素0.05 mM、MnCl2 0.6mM、AMV反转录酶 0.2U、甜菜碱 0.8M、脱氧核苷酸dNTPs 1.4mM、Bst聚合酶8U。
6.根据权利要求2或3所述的检测试剂盒，特征在于所述的检测试剂盒中还包括荧光显色剂。
7.根据权利要求6所述的检测试剂盒，特征在于荧光显色剂为钙黄绿素和MnCl2。
8.一种禽传染性支气管炎病毒的检测方法，其特征是使用权利要求2或3所述的检测试剂盒对样品RNA进行环介导等温扩增反应，同时设置阳性对照组和阴性对照组，所述环介导等温扩增反应条件为：59-65℃、30-75分钟。
9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于将进行完环介导等温扩增反应的样本在80℃条件下反应2分钟。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于山东省农业科学院畜牧兽医研究所，未经山东省农业科学院畜牧兽医研究所许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201210040492.8/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
