[发明专利]用于分选带有X或Y染色体富集群的精子悬浮液

说明书

本申请为2005年3月29日提交的、发明名称为“用于分选带有X或Y染色体富集群的精子悬浮液”的PCT申请PCT/US2005/010481的分案申请，所述PCT申请进入中国国家阶段的日期为2006年11月28日，申请号为200580017370.5。

发明领域

本发明主要涉及分选精子细胞的方法。更具体而言，本发明涉及制备精子细胞运动性相对于体内射精精子降低的悬浮液，更具体而言是运动性暂时降低；所述悬浮液可用于如将精子细胞分选为带有X或Y染色体的富集精子细胞群的方法。

发明背景

通过人工授精(AI)使动物受精以及体外受精后的胚胎移植已经是一项成熟的技术。在家畜产业中，能够对繁殖结果施加影响而使其后代具有一种或多种所需特征，有明显的优势。例如，乳制品产业中如能预先选择后代有利于雌性而保证奶牛的产量，则会带来经济效益。将精子分离为富集的带有X和Y染色体的细胞群，即所谓的性别富集精液或性别富集精子，便是达到后代预选目的的方法之一。

为得到性别富集精液，必须将精子细胞以染料染色，然后分选为带有X和Y染色体的细胞。染色和分选过程的每一步对于精子细胞而言都是应激，会导致精子细胞的存活力或运动性，特别是前向性运动性降低。

Salisbury等人描述了将公牛射出的精液直接收集至稀释液中的技术，所述稀释液可抑制细胞的运动性并防止其从周围精浆中吸收糖。当收集射出精液至稀释液中，且通过充气100％的CO₂替换液体上方的气相时，射出精液内的细胞会丧失运动性。只要将细胞留存于该稀释液中且排除空气，就可以保证其在室温下数小时不运动，而在5℃时可维持至少8天。

发明概述

本发明的多方面之一涉及精子悬浮液，所述精子悬浮液可用于如将精子分选为带X或Y染色体的富集精子群的方法。

因此简言之，本发明涉及含有活精子以及下调精子糖摄取的组合物的精子细胞悬浮液，所述悬浮液中的精子浓度小于约1×10⁶精子/ml或至少为1×10⁸精子/ml。

本发明还涉及含有不运动活精子的精子细胞悬浮液，所述悬浮液中的精子浓度小于约1×10⁶精子/ml或至少为1×10⁸精子/ml。

本发明还涉及含有活精子的精子细胞悬浮液，所述精子相对于同一种系体内射出的精子更具附睾中精子的运动性特点，所述悬浮液中的精子浓度小于约1×10⁶精子/ml或至少为1×10⁸精子/ml。

本发明还涉及含有活精子、钾、并任选地含有钠的精子细胞悬浮液，所述悬浮液中的精子浓度至少为1×10⁸精子/ml，而钾与钠的摩尔比大于各1∶1。

本发明还涉及含有活精子、下调精子糖摄取的组合物、以及DNA选择性染料的精子细胞悬浮液。

本发明还涉及含有不运动活精子和DNA选择性染料的精子细胞悬浮液。

本发明还涉及含有活精子和DNA选择性染料的精子细胞悬浮液，所述精子相对于同一种系体内射出的精子，其代谢率和运动性更具附睾中精子的特点。

本发明还涉及含有不运动活精子的精子细胞悬浮液，所述精子的DNA上结合有DNA选择性染料。

本发明还涉及含有活精子的精子细胞悬浮液，相对于同一种系体内射出的精子而言，所述精子代谢率和运动性更具附睾中精子的特点，且其DNA上还结合有DNA选择性染料。

本发明还涉及对精子细胞染色的方法，所述方法包括形成这样的染色混合物，其含有完整的活精子细胞、运动抑制性量的钾，以及DNA选择性染料。

本发明还涉及形成用于流式细胞术方法的精子细胞悬浮液的方法，所述方法包括将精子细胞源与抑制精子细胞运动性的组合物混合，以形成精子细胞悬浮液，所述悬浮液中精子细胞浓度小于约1×10⁶精子细胞/ml或至少为1×10⁸精子细胞/ml。

本发明还涉及形成用于流式细胞术方法的精子细胞悬浮液的方法，所述方法包括将哺乳动物射出精液收集至含有抑制性量的运动抑制剂的缓冲液中以形成精子悬浮液，所述悬浮液中含有精子浓度小于约1×10⁶精子细胞/ml或至少为1×10⁸精子细胞/ml。

本发明的其它方面和特征是显而易见的，部分将于后文说明。