[发明专利]一种D-塔格糖3-差向异构酶固定化方法

权利要求书

1.一种D-塔格糖3-差向异构酶固定化方法，其特征在于包括下列步骤：

（1）获取酶液：称取R．sphaeroides SK01l发酵菌体，按质量体积比1:10的比例，加入50mmol/L Tris-HCl、50mmol/L NaCl、pH7.0-8.0缓冲液重悬菌体，利用超声波细胞破碎仪处理菌体后，在转速为6000~10000r/min、温度为0~5℃的条件下离心10~30min，收集上清液，此上清液即为D-塔格糖3-差向异构酶液；

（2）离子交换树脂处理：采用313、或D301-Ⅲ离子交换树脂，先用去离子水浸泡胀润、去杂，接着用质量浓度4%NaOH溶液浸泡12h后去离子水清洗至中性，再用质量浓度4%HCl溶液浸泡12h后去离子水清洗至中性，最后用质量浓度4%NaOH溶液浸泡12h后去离子水清洗至中性，用两倍树脂体积的去离子水浸泡，4℃下保存；

（3）固定化：采用先吸附后交联的方法，向处理好的离子交换树脂中加入D-塔格糖3-差向异构酶液，每g树脂加入D-塔格糖3-差向异构酶粗酶液1-6mL，并加入上述Tris-HCl缓冲液补足6mL，于pH 7.0~8.0、20~40℃吸附6~12h后取出；加入戊二醛溶液至终浓度为0.01%~0.2%，于2~8℃轻轻振荡交联1~5h，用去离子水洗涤以除去游离酶和未交联的戊二醛，即得到固定化的D-塔格糖3-差向异构酶。