[发明专利]一种肿瘤标志物CD25自身抗体及应用

说明书

技术领域

本发明属于免疫学技术领域，是一种用于制备肿瘤早期诊断试剂和开发治疗肿瘤的靶向药物。

背景技术

大量研究表明，血清或血浆中的肿瘤相关抗原能诱导机体产生自身抗体，在肿瘤患者血清中既存在肿瘤抗原，也存在针对该肿瘤抗原的自身抗体。因此，既可以利用抗体检测肿瘤抗原，也可以利用抗原检测肿瘤自身抗体，但利用肿瘤自身抗体检测肿瘤的特异性和敏感性均比利用肿瘤抗原检测肿瘤要高得多。很多肿瘤相关抗原不仅在肿瘤患者体内存在，在正常人体内也存在，因此检测肿瘤相关抗原作为诊断依据可信性差。而自身抗体在正常人体内含量很低检测不到或根本不存在，若体内自身抗体水平明显增高，则表明体内存在异常免疫情况，表明体内相关抗原水平发生波动，预示疾病的存在或原有疾病加重。

近年来的研究表明，在恶性肿瘤体积发展到可用现代影像学技术检出之前3-5年，患者血中可出现高浓度的肿瘤相关抗原自身抗体。因此，检测血中肿瘤相关抗原自身抗体具有预测肿瘤发病风险和早期诊断肿瘤的重要价值。是肿瘤临床诊断领域的重点发展方向之一。在国外已有诊断肺癌和乳腺癌的早期诊断试剂盒市售。然而，目前所报道的抗体检测方法敏感度低，特异性差，假阴性比率可高达50％以上。其主要原因是由于每一种肿瘤相关抗原自身抗体在患者中的阳性检测率平均在10％左右。如何提高诊断试剂敏感度是当前需要亟待解决的关键问题。比较行之有效的方法是寻找新的可充当肿瘤标志物的自身抗体，然后与现有已知的自身抗体组合成具有敏感度高和特异性强的诊断试剂盒。

肿瘤可通过各种直接或间接的机制来逃避机体免疫系统的监控。一系列的研究已经证明，调节性Treg细胞与肿瘤免疫逃避机制密切相关。在肺癌、乳腺癌、卵巢癌以及出现淋巴结转移的黑色素瘤患者的外周血淋巴细胞和肿瘤浸润淋巴细胞中，存在Treg细胞比例增高现象。Treg通过细胞与细胞直接接触或通过细胞因子的释放，对效应性CD4+/CD8+T细胞活化和增殖发挥抑制作用。其效应机制主要是抑制CD4+T细胞增生、抑制肿瘤特异性抗原激活的CD4+效应细胞分泌IL-2，抑制CD8+IFN 2C和TNF2A产生，并在肿瘤微环境中能限制CTLs细胞毒性颗粒释放，使肿瘤细胞逃逸免疫杀伤。本发明中的CD25是Treg细胞的主要表面标志物。

调节性Treg细胞是来源于胸腺的CD4+T细胞，其组成性表达的IL 2受体的α链被命名为CD25，CD25是Treg细胞活化的重要标志。CD25作为I型跨膜蛋白对多种T细胞和B细胞活化亦发挥关键作用。CD25与CD122共同组成高亲和力的IL 2受体，它们可溶性受体即sIL-2R被证实与多种肿瘤发生相关，已成为几种肿瘤发生进展的临床标志物。国内外研究显示，在CD4+/CD25+T细胞中，只有CD4+/CD25hight细胞才是具有免疫抑制功能的Tregs。同时研究发现肺癌、卵巢癌、胃肠道肿瘤等多种肿瘤患者外周血和肿瘤局部Tregs增加。Tregs通过抑制活化的T细胞，限制免疫反应的发生，从而在维持肿瘤免疫耐受中发挥重要作用。动物实验已证实，给荷瘤小鼠应用抗CD25单抗可抑制动物体内Tregs，可提高小鼠抗肿瘤免疫功能。体外实验证实从外周血中去除Tregs，可以产生更多的细胞毒细胞，包括CTL和LAK/NK细胞等。最新研究发现，在脑胶质瘤患者中随疾病进程，CD4+/FOXP3+Tregs细胞时间依赖性增加的同时伴随CD25的高度表达，而应用抗CD25单抗可显著抑制CD4+/FoxP3+Tregs细胞的增加。本发明通过自行设计的CD25的抗原表位多肽，检测肿瘤患者血清及血浆中自身抗体水平并开发相应的试剂，预测肿瘤发生的危险性，并为肿瘤新药研究提供可靠的数据。

发明内容

本发明要解决的技术问题是公开一种肿瘤标志物CD25自身抗体。

本发明同时公开了CD25自身抗体的用途。

本发明提供的一种肿瘤标志物CD25自身抗体的氨基酸序列为：

EIYHFVVGQMVYYQCVQGYRALHRGPAESVE  纯度＞95％，pH＞7.0。

本发明所述的CD25抗原多肽在制备预测肿瘤早期诊断试剂盒中的应用。

本发明利用自行设计的CD25蛋白的线性多肽，采用ELISA法检测肺癌和食管癌患者血清及血浆中抗CD25蛋白的特异性自身IgG抗体。自身IgG抗体水平升高表明肿瘤患者体内CD25蛋白的表达量增加，预示患者可能出现原发性或继发性肿瘤，可以预测肿瘤发生与复发的危险性，指导临床医生对肿瘤的早期诊断。

CD25蛋白质氨基酸序列见Tab.1