[发明专利]一种提取肺间充质干细胞的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种大量提取肺间充质干细胞的方法。

背景技术

干细胞研究在近10余年有了快速的进展。干细胞治疗在许多动物疾病模型上显示出了良好的治疗效果。如间充质干细胞经气管内滴注或经静脉注射可以明显减轻LPS或细菌导致的急性肺损伤。间充质干细胞还可以减轻心肌梗塞导致的心肌缺血。体内研究发现，KGF-2具有抗纤维化作用，对博莱霉素诱导的肺纤维化有保护作用。体外研究发现，KGF-2对机械牵张力诱导的肺泡上皮细胞DNA损伤及凋亡具有保护作用，对过氧化物及石棉诱导的肺泡上皮细胞损伤也具有保护作用，且这种保护作用由MAPK信号通路介导。此外，研究还发现KGF-2可短效调节Na，K-ATP酶的活性。欧洲的一项7000例慢性阻塞性支气管炎的患者在接受干细胞治疗后6个月出现肺功能的改善。间充质干细胞在治疗效果上甚至还优于胚胎干细胞。从疗效和伦理的角度，间充质干细胞分离和培养有巨大的优势。

与异体干细胞相比，自体干细胞治疗更有优越性，如避免了可能存在的感染风险，以及潜在的免疫排斥反应等。自体干细胞分离和培养一般有几个途径，如骨髓的干细胞分离，脐带血的干细胞分离以及组织器官特异性的干细胞分离。有研究显示肺损伤后的修复主要来源于肺组织内的干细胞。组织原位的干细胞在调节炎症反应，组织修复，纤维化控制，血管再生等方面有重要作用。因此，对于肺部疾病的治疗，直接分离出肺的干细胞进行培养后回输治疗肺部疾病有特别的意义。

目前在动物实验上分离肺组织的干细胞往往需要先分离出肺组织，剪碎，研磨，培养，流式细胞仪筛选后继续培养，然后再进行干细胞的鉴定。过程复杂，更重要的是需要把肺切碎。另外一种方法是通过肺泡灌洗分离肺原位干细胞。这个方法已经在动物实验和志愿者身上进行了探索。动物实验的研究结果表明单纯支气管肺泡灌洗能得到的干细胞数目很少，对进行实验研究造成了极大的不便。如果能预处理肺脏，然后进行肺泡灌洗，明显提高原位干细胞分离效率的话，不仅是一个重要的新型技术，而且会有潜在的重要临床应用价值。

角质细胞生长因子-2(keratinocyte growth factor-2，KGF-2)是成纤维细胞生长因子家族中的23个成员之一，又称为成纤维细胞生长因子-10(fibroblast growth factor-10，FGF-10)。人KGF-2是1997年Emoto等首先从人的肺中分离出的具有肝素结合特异性的单链多肽，因与1989年发现的KGF在结构、性质、功能等方面的同源性而得名。KGF-2包含208个氨基酸，其N端是由39个疏水氨基酸组成的信号肽序列，其分子结构与小鼠的同源性达96％。KGF-2由成纤维细胞和其它间充质来源的细胞分泌，特异性作用表达于上皮细胞表面的酪氨酸激酶受体，以间质-上皮相互作用的旁分泌方式有效地促进各种来源上皮细胞的增殖、移行和分化。