[发明专利]副溶血性弧菌多重定量PCR检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种副溶血性弧菌毒素基因多重定量PCR检测试剂盒，主要包括特异性引物和探针以及PCR反应试剂，所述特异性引物和探针由副溶血性弧菌耐热直接溶血素基因(tdh)、不耐热溶血素基因(tlh)、毒素表达调控蛋白基因(toxR)和耐热相关溶血素基因(trh)的特异性引物和探针组成：

tdh上游引物：5′-TCTGCTTTTGAGCTTCCATCTGT-3′；

tdh下游引物：5′-TGACCGGAGCTTGGGTATTAA-3′；

tdh荧光探针：

5′-FAM-CCTGCCCCCGGTTCTGATGAGATATT-BHQ1-3′；

tlh上游引物：5′-CCAGAAGAGCACGGTTTC-3′；

tlh下游引物：5′-GGTGTACATGTAATCGACAGACGAT-3′；

tlh荧光探针：

5′-VIC-CGATCCTTGTTTGGACATCAACCGCT-BHQ1-3′；

toxR上游引物：5′-TTCCGTCAGATTGGTGAGTATCAG-3′；

toxR下游引物：5′-TGCTCAATAGAAGGCAACCAGTT-3′；

toxR荧光探针：

5′-ROX-TGATGACACCTGTAAATCACCCGCAAATC-BHQ2-3′；

trh上游引物：5′-TGCTATTGGCTTCGATATTTTCAGTA-3′；

trh下游引物：5′-CGAACCTGGAGAAGGAAAAGGT-3′；

trh荧光探针：

5′-CY5-CTAAATCATTCGCGATTGACCTGCCATC-BHQ2-3′；

其中FAM、VIC、ROX和CY5为不同波长的荧光报告基团，BHQl和BHQ2为荧光淬灭基团。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述试剂盒还包括副溶血性弧菌耐热直接溶血素基因(tdh)、不耐热溶血素基因(tlh)、毒素表达调控蛋白基因(toxR)和耐热相关溶血素基因(trh)的标准品，所述标准品序列如下：

tdh标准品：tctgcttttga gcttccatct gtcccttttc ctgcccccg gttctgatga gatattgttt gttgttcgag atacaacttt taatacccaa gctccggtca；

tlh标准品：ccagaagagc acggtttcgt gaacgcgagt gatccttgtt tggacatcaa ccgctcatcg tctgtcgatt acatgtacacc；

toxR标准品：ttccgt cagattggtg agtatcagaa cgtaccagtg atgacacctg taaatcaccc gcaaatcaac aactggttgc cttctattga gca；

trh标准品：tgctattg gcttcgatat tttcagtatc taaatcattc gcgattgacc taccatccat accttttcct tctccaggtt cg。