[发明专利]一种评测猪饲料消化能的仿生酶法

说明书

技术领域

本发明涉及一种仿生酶法，尤其涉及一种评测猪饲料消化能的仿生酶法，属于饲料消化能的仿生评测领域。

背景技术

仿生酶法主要是通过模拟动物肠道消化内环境、体外消化吸收营养物质的过程，能应用于分析测定饲料的消化能。消化能是饲料主要营养指标之一，也是进行饲料配方的主要依据。目前猪饲料消化能值均是通过生物学法获得，但费时费力费资。随着对饲料消化能测定方法研究的不断发现，动物营养学家对体外酶法测定饲料消化能进行了大量研究。全收粪法测定饲料消化能是比较公较公认的经典测定消化能的方法，但费时、费力，同时，也有很多因素会影响试验结果的准确性。仿生酶法通过体外模拟动物胃肠道环境，进行体外营养物质消化率的消化能的测定，虽然省时，省力，但同样有很多因素影响试验结果的准确性，例如：各阶段消化酶的组成，消化酶的活性，酶解温度与时间等。

目前还不能对营养物质的体内消化进行完全的体外模拟，体外消化测定的营养物质消化率和体内法所测值相比还有一定差距。在饲料工业生产中，饲料常规成分分析中饲料养分分析的最大偏差一般要求在3％-5％以下。仿生酶法的精确性是仿生酶法能够在生产实际进行推广的前提和基础。总之，现有的用于评测饲料消化能的仿生酶法均不同程度的存在着精度较低、稳定性和重复性较差等缺陷，不能够在生产实际中进行推广应用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种精度高、稳定性强、重复性好的评测饲料消化能的仿生酶法。

本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：

一种评测猪饲料消化能的仿生酶法，包括以下步骤：(1)将猪饲料粉碎后与缓冲液混合均匀，加入仿生的动物胃液消化酶混合均匀，调整pH值为酸性后进行胃仿生消化，得到胃仿生消化液；(2)向胃仿生消化液中加入缓冲液，调整pH值后加入仿生的动物小肠消化酶液进行小肠仿生消化，得到小肠仿生消化液；(3)将小肠仿生消化液调整pH值后加入仿生的动物大肠消化酶液进行大肠仿生消化得到大肠仿生消化液；(4)将大肠仿生消化液过滤，测定残渣重，计算消化能。

其中，步骤(1)中所述的缓冲液优选为磷酸盐缓冲液，进一步优选为pH值为6.0、浓度为0.2M的磷酸盐缓冲液；所述的仿生的动物胃液消化酶为胃蛋白酶；步骤(1)中所述的酸性pH值优选为2.0；所述的消化时间优选为1-6小时，进一步优选为2小时；所述的消化温度优选为36-40℃，进一步优选为39℃。

步骤(2)中所述的缓冲液优选为磷酸盐缓冲液，更优选为pH值为6.8、浓度为0.2M的磷酸盐缓冲液；步骤(2)中将胃仿生消化液的pH值调为6.8后加入仿生的动物小肠消化酶液进行消化。

仿生酶法的关键就在于人工消化液的配制，特别是人工小肠消化酶液的配制。为了使人工小肠消化酶液更接近动物体肠道内环境，需要摸索出更接近活体的酶谱。本发明通过试验发现，动物小肠消化酶液的由胰蛋白酶，糜蛋白酶，淀粉酶和脂肪酶组成时最为接近动物体肠道内环境。本发明通过进一步的试验发现，动物小肠液主要酶活受到饲料种类，不同能量蛋白及动物个体的影响，酶活性波动极大，将胰蛋白酶，糜蛋白酶，淀粉酶和脂肪酶的酶活控制在以下变化范围内能够较好的接近动物体肠道内环境：控制胰蛋白酶的酶活变化范围为21.24-67.39U/ml；控制糜蛋白酶的酶活变化范围为3.45-19.17U/ml；控制淀粉酶酶活变化范围为15.52-251.43U/ml；控制脂肪酶酶活变化范围为0.021-3.59U/ml。本发明通过大量的试验更进一步的发现，将胰蛋白酶，糜蛋白酶，淀粉酶以及脂肪酶的平均酶活作为体外酶法中人工小肠液的酶活，具有一定的可行性并能更好的模拟体内小肠液的酶活。其中，将胰蛋白酶的平均酶活控制为43.92±1.93U/ml、糜蛋白酶的平均酶活控制为6.89±0.48U/ml、淀粉酶平均酶活控制为108.19±9.01U/ml；脂肪酶平均酶活控制为0.416±0.12U/ml时，与动物小肠体内小肠液的酶活最为接近。

步骤(2)中所述的消化时间优选为2-14小时，进一步优选为4-12小时，最优选为4小时；所述的消化温度优选为36-40℃，更优选为39℃。

步骤(3)中将小肠仿生消化液中加入EDTA溶液终止酶反应后将pH值调整pH值4.8后加入仿生的动物大肠消化酶液进行大肠仿生消化；所述的仿生的动物大肠消化酶液是碳水化合物酶；步骤(3)中所述的消化时间为优选16-22小时，优选为20小时。