[发明专利]对镉具有高抗性的皮氏罗尔斯通氏菌及其提取方法及应用

权利要求书

1.一种对镉具有高抗性的皮氏罗尔斯通氏菌，其特征在于：该菌株对镉具有高抗性并且具有降解苯酚能力；其16S rDNA序列见序列表SEQ.ID.NO1，保藏号为CGMCC No.5726。

2.一种对镉具有高抗性的皮氏罗尔斯通氏菌的提取方法，包括：

(1)通过Cd²⁺在0.1×PTYG培养液中梯度压力式驯化法驯化，多次平板涂布法分离直至得到耐受性较高的单菌落DX-T3-01。在不同Cd²⁺浓度的0.1×PTYG培养液中观察其生长状况；并通过0.1×PTYG固体培养基检测筛选菌株对重金属镉的最低抑制浓度；

(2)对0.4mM/L Cd²⁺浓度培养24h后菌体进行SEM-EDX、FTIR分析，结果验证了菌体表面对Cd²⁺的吸附作用。

3.根据权利要求2所述的一种对镉具有高抗性的皮氏罗尔斯通氏菌的提取方法，其特征在于：所述步骤(1)中的0.1×PTYG培养基成分为：每升培养基包含0.25g蛋白胨，0.25g胰蛋白胨，0.5g酵母浸膏，0.5g葡萄糖，30mg MgSO₄·7H₂O，3.5mg CaCl₂·2H₂O，0.3g放线菌酮，蒸馏水定容至1L，1×10⁵Pa灭菌30min，pH＝7。

4.根据权利要求2所述的一种对镉具有高抗性的皮氏罗尔斯通氏菌的提取方法，其特征在于：所述步骤(1)中的梯度压力式驯化法为在0.1×PTYG培养基中，分别依次加入Cd²⁺使其浓度为2、4、6、8、10、12、14、16、18、20mM/L，改变浓度的间隔时间为5-7d，于30℃，150r/min条件下进行驯化培养。

5.根据权利要求4所述的一种对镉具有高抗性的皮氏罗尔斯通氏菌的提取方法，其特征在于：所述步骤(1)中的不同Cd²⁺浓度为0、1、2、3、4、5、6、8、10mM/L，0.1×PTYG固体培养基为0.1×PTYG液体培养基基础上加入质量分数1.5％的琼脂，1×10⁵Pa灭菌30min，筛选菌株对重金属镉的最低抑制浓度为4mM/L。

6.一种对镉具有高抗性的皮氏罗尔斯通氏菌的应用，包括：

将皮氏罗尔斯通氏菌置于无机盐培养基中，无机盐培养基中均含有苯酚和Cd²⁺的样品中，在30℃、150r/min的条件下进行培养，培养时间为100h，即能降解苯酚。

7.根据权利要求6的一种对镉具有高抗性的皮氏罗尔斯通氏菌的应用，其特征在于：所述步骤无机盐培养基为KH₂PO₄ 1.0g，(NH₄)₂SO₄ 1.0g，NaCl 1.0g，CaCl₂·2H₂O 0.1g，MgSO₄·7H₂O 0.2g，蒸馏水定容至1L，1×10⁵Pa灭菌30min，pH值为7。