[发明专利]抗毒素/抗血清中甘氨酸含量的测定方法

权利要求书

1.一种抗毒素/抗血清中甘氨酸含量的测定方法，包括分别吸取衍生化后的对照品溶液和衍生化后的供试品溶液，采用常规高效液相色谱法进行测定，再按常规方法测定甘氨酸和正缬氨酸的峰面积，以内标法计算，即得到抗毒素/抗血清中甘氨酸的含量，其特征在于所述衍生化后的对照品溶液和衍生化后的供试品溶液的制备经过下列各步骤：

（1）将内标物用水溶解，制成浓度为3～5mg/mL的内标物溶液；

（2）将对照品甘氨酸用水溶解，制成浓度为20～30mg/mL的对照品贮备液；在1.0mL对照品贮备液中加入9.0mL质量浓度为1.5%的磺基水杨酸，混匀后至少静置2小时，在3000转/分的转速下离心分离10min，取分离后的上清液0.4mL，用水稀释至10mL，即得到对照品溶液；

（3）取供试品抗毒素、抗血清1.0mL，向其中加入9.0mL质量浓度为1.5%的磺基水杨酸，混匀后至少静置2小时，在3000转/分的转速下离心分离10min，取分离后的上清液1.0mL，用水稀释至10mL，即得到供试品溶液；

（4）分别取步骤（2）所得对照品溶液和步骤（3）所得供试品溶液各0.4mL，在各溶液中分别加水1.6mL，再分别加步骤（1）所得内标物溶液0.08mL，涡旋混合15s，再分别加入1.0mL含三乙胺的乙腈溶液，三乙胺的浓度为1mol/L，混匀，接着分别加入1.0mL含异硫氰酸苯酯的乙腈溶液，异硫氰酸苯酯的浓度为0.1mol/L，涡旋混合30s，室温放置1小时，最后分别加入正己烷4mL，振摇后放置10min，取下层溶液进行过滤，滤液即为衍生化后的对照品溶液和衍生化后的供试品溶液。

2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：所述步骤（1）的内标物为α-氨基丁酸或缬氨酸。

3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：所述采用高效液相色谱法的色谱条件为：反相液相色谱柱，以浓度为0.01～0.1mol/L、pH为6.5的醋酸钠溶液为流动相A，以乙腈︰水的体积比为90︰10～70︰30的乙腈-水溶液为流动相B，用流速为1mL/min的洗脱液进行梯度洗脱，并采用紫外检测器，其检测波长为245～265nm。