[发明专利]一种获得胚性愈伤组织诱导率高的高羊茅种子的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种获得胚性愈伤组织诱导率高的高羊茅种子的方法。

背景技术

建立高效简便的再生体系对通过基因工程的方法获得具有实际应用价值的草坪草至关重要。从上个世纪70年代至今经过几十年的研究，大多数重要草坪草都建立了再生体系，并且也已经建立了遗传转化体系，目前已经朝着改良草坪草抗逆性、抗病虫害等具有实际应用价值的方向发展(Creemer MT, Loeffe JPM, Zaal MACM (1998). Isolation culture and regeneration of Lolium perenne and Lolium multif lorum  protoplasts. Curr Plant Sci Biotech Agric,7(1):53~54；Dalton SJ (1988). Plant regeneration from cell suspension protoplasts of Festuca arundinacea Schreb., Lolium perenne L. and L. multiflorum. Plant Cell Tiss Org, 12:137~140；Spangenberg G, Wang Z-Y, Nagel J et al (1994). Protoplast culture and generation of transgenic plants in red fescue (Festuca rubra L.). Plant Sci.,97:83~94；Takamizo T, Suginobu KI, Ohsugi R (1990). Plant regeneration from suspension culture-derived protoplasts of tall fescue (Festuca arundinacen Schreb.) of a single genotype [J].Plant Sci, 72(1):125~131；Wang Z-Y, Nagel J, Potrykus I (1993). Fertile plant regeneration from protoplasts of meadow fescue (Festuca pratensis Huds.). Plant Cell Reports, 1(12):95~100；Asano Y and Sugiura K (1990). Plant regeneration from suspension culture-derived protoplasts of Agrostis alba L.(redtop). Plant Sci, 72(1):267~273；Terakawa T, SatoT, Koike M (1992). Plant regeneration from proto-plasts isolated from embryogenic suspension cultures of creeping bentgrass (Agrostis palustris Huds.). Plant Cell Reports, 11(1):457~461；Zhong H, Srinivasan C, Sticklen M B (1991). Plant regeneration via somatic embryogenesis in creeping bentgrass (Agrostis palustris Huds.). Plant Cell Reports, 10(1): 453~456；)。目前在草坪草上获得成功的再生体系主要有愈伤组织再生系统，悬浮细胞再生系统，原生质体再生系统、直接分化再生系统等。

虽然如高羊茅，黑麦草等几大类草坪草都建立了比较有效的再生体系，但是也存在着诸多的问题。在草坪草的转基因研究中，愈伤组织和胚性悬浮细胞是最常用的转化受体。由于高羊茅等草坪草种子的高度异质性，愈伤组织再生系统面临的一个巨大问题就是胚性愈伤组织诱导率低，出现具有强烈分化能力的愈伤组织块极少，这给遗传操作带来了不可避免的重复工作和劳动量。胚性细胞悬浮再生系统虽然在一定的时间内能够大量获得胚性愈伤组织，但是其实际操作繁琐，并且前期需要极高的对胚性愈伤组织的鉴别力，同时胚性培养物随着继代次数的增多胚性迅速丧失，出现白化苗的概率增加。原生质体是通过分离胚性细胞悬浮系而得到的，实际操作更加烦琐，转基因筛选困难，更不易获得转基因再生苗。 

发明内容