[发明专利]一种新型治疗肝病及痛风药物的筛选方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种新型治疗肝病及痛风药物的筛选方法。

背景技术

黄嘌呤氧化酶简介：黄嘌呤氧化酶(XOD)属需氧脱氢酶类，是体内核酸代谢中一个重要的酶。它由两个分子量为140000的亚基所组成，每个亚基内有一个钼原子、两个Fe₂S₂(SR)₄，原子簇和一个黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)。

黄嘌呤氧化酶作用简介：

黄嘌呤人体内的次黄嘌呤和黄嘌呤在黄嘌呤氧化酶(XOD)的存在下，发生下列反应：

反应后的产物是尿酸和过氧化氢，尿酸积累在血液中，过剩时会引起痛风病，反应中形成的超氧自由基O₂^-涉及到炎症、硬化、癌症等病理过程。

同时由于黄嘌呤氧化酶主要存在于肝脏，当肝细胞损害时，血清XOD活性呈不同程度的升高，因此XOD抑制剂对肝炎治疗有利，也可以减少氧化造成的伤害(E.J.Oliveira，et al.In vitro glucuronidation of kaempferol and quercetin by human UGT-1A9 microsomes.)。

基于以上原理，我们设计了一种以黄嘌呤氧化酶制剂作用为评价手段的筛选技术，以中药材泽泻为例进行评价，结果表明泽泻具有良好的黄嘌呤氧化酶抑制作用，这也与文献报道的泽泻可以用于肝病(中西医结合杂志《泽泻与高脂血症、动脉粥样硬化和脂肪肝》)及痛风(辽宁中医杂《重用泽泻辩证治疗急性痛风性关节炎120例》)的治疗相一致，因此该方法也可以推广至其它对肝病、痛风有效的药材的筛选中。

有两种方法可减少人体内尿酸、超氧自由基和过氧化氢的形成：一是降低人体内次黄嘌呤和黄嘌呤的含量；二是降低人体内黄嘌呤氧化酶的活性，这可通过对酶的抑制作用来实现，所以寻找黄嘌呤氧化酶的抑制剂和研究黄嘌呤氧化酶的抑制作用在医学和人体代谢研究方面有重要的意义。

黄嘌呤氧化酶XOD的测定方法很多，主要有分光光度法、电化学法、荧光法和放射化学法等，仪器设备要求高，申请人选用的是适用于普通实验室的XOD比色测定法。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明提供了一种新的方法(以黄嘌呤氧化酶抑制能力)来筛选治疗肝病、痛风等疾病的治疗药物，具体筛选内容包括处方组成、提取工艺等。

一种治疗肝病及痛风药物的筛选方法，其特征在于：

(1)黄嘌呤氧化酶初步测定方法的建立：XOD可催化基质中的次黄嘌呤(或黄嘌呤)生成黄嘌呤(或尿酸)，与此同时产生的超氧离子(O₂^-)将硝基四唑蓝还原成紫红色的甲臢。根据甲臢的生成量可推算XOD活力。

(2)仪器：T6-新世纪紫外可见分光光度仪(上海普稀通用责任有限公司)，水浴锅(上海精宏实验设备有限公司)，PH计(雷磁上海精科)。

(3)试验用各试剂的配制：

①空白基质液：PH8.3的0.1MK₂HPO₄-KH₂PO₄缓冲液。内含0.2％TritonX-100。

②测定基质液：0.034mg/ml黄嘌呤空白基质液。

③反映显色剂：0.15mg/ml硝基四唑蓝蒸馏水溶液。

④反应终止液：0.35M HCl。

⑤黄嘌呤氧化酶溶液：0.2％黄嘌呤氧化酶(50U)空白基质溶液。

⑥供试液。

⑦别嘌呤醇溶液：0.007mg/ml别嘌呤醇溶液。

(4)操作步骤：每个试管中总体积为8ml：酶促反应体系中含测定基质液2ml，黄嘌呤氧化酶溶液1ml，反应显色剂2ml，黄嘌呤溶液1ml，反应终止液1ml，其余用空白基质液补足；37℃水浴15min终止反应；根据文献报道波长在560nm时有最大吸收值。吸光度与XOD活力做标准曲线：y＝0.0163x+0.0044r＝0.999096。

(5)筛选：

利用上述步骤建立的方法以黄嘌呤氧化酶抑制作用为指标筛选药材和提取工艺。

本发明的有益效果：提供了一种新的方法(以黄嘌呤氧化酶抑制能力)来筛选治疗肝病、痛风等疾病的治疗药物，具体筛选内容包括处方组成、提取工艺等。

具体实施方式

黄嘌呤氧化酶初步测定方法的建立：